本文關(guān)鍵詞：順鉑誘導(dǎo)HBV再激活的分子機制研究

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【摘要】：據(jù)世界衛(wèi)生組織報道,全世界目前約有20億人曾感染過乙肝病毒,其中約有4億成為乙肝表面抗原陽性的慢性攜帶者,而其中的75%的慢性攜帶者是中國人;中國每年因乙肝病毒感染致死的近50萬人,居全球首位。在我國,乙型肝炎病毒感染是誘發(fā)慢性肝炎,肝硬化和肝癌的重要危險因子。據(jù)統(tǒng)計,HBV再激活現(xiàn)象在無癥狀攜帶者和慢性乙肝患者中極少發(fā)生,但如果接受免疫抑制劑或或化療藥物治療時,會有一定幾率活化處于靜息狀態(tài)或是低復(fù)制狀態(tài)的乙肝病毒.大量瞬時活化的乙肝病毒會誘發(fā)患者急性肝炎、急性肝衰竭甚至爆發(fā)性肝衰竭,使化療中斷,耽誤腫瘤患者的正常治療和預(yù)后,嚴(yán)重時可能危及患者生命。2011年,惡性腫瘤上升為人類死亡病因的第3位,其發(fā)病率和致死人數(shù)逐年上升。2011年,臨床統(tǒng)計HBV再激活的發(fā)病率為14%-66%,HBV再激活已經(jīng)成為嚴(yán)重威脅中國人健康的重要公共衛(wèi)生問題。順鉑等化療藥物可以誘導(dǎo)HBV再激活的現(xiàn)象已被國內(nèi)外多項臨床試驗證實,但是其誘導(dǎo)乙肝病毒復(fù)制再激活的分子機制至今尚不清楚。目前解釋該現(xiàn)象的機制有兩種:第一種,化療藥物如順鉑具有很強的免疫抑制能力,通過抑制機體的免疫系統(tǒng),使乙肝病毒免疫逃逸,乙肝病毒大量復(fù)制誘發(fā)HBV再激活。大多數(shù)學(xué)者認(rèn)同這一機制。第二種,化療藥物順鉑可以直接促進乙肝病毒復(fù)制。目前國內(nèi)外關(guān)于順鉑直接促進hbv再激活以及相關(guān)分子機制的研究報道還是空白,本課題設(shè)計就是針對這一空白,研究探討順鉑直接促進hbv復(fù)制的相關(guān)的分子通路。我們首先在體外成功構(gòu)建了環(huán)化自連的hbvdna(circμlarizedhbvdna)并證實:無論在體內(nèi)還是體外,環(huán)化的hbvdna的感染效率和復(fù)制水平均明顯優(yōu)于線性的hbvdna(p0.05)。使用環(huán)化的hbvdna構(gòu)建的hbv水動力小鼠模型,并使用回交傳代法提高已有的c57hbv轉(zhuǎn)基因小鼠的遺傳穩(wěn)定性,為下一步的實驗研究提供hbv高效復(fù)制的動物模型。其次選用乙肝病毒穩(wěn)定表達(dá)的c57hbv轉(zhuǎn)基因小鼠模型和前期構(gòu)建的hbv水動力小鼠模型,通過elisa、real-timepcr、western-blot、southern-blot、ihc和chip等實驗進行hbv再激活的體內(nèi)驗證實驗,檢測順鉑是否可以在體內(nèi)誘導(dǎo)hbv再激活。實驗研究順鉑誘導(dǎo)hbv再激活的分子機制:首先,篩選與hbv再激活相關(guān)的hbv啟動子和肝富集轉(zhuǎn)錄因子;其次,選取其中代表性的轉(zhuǎn)錄因子pgc-1α和hnf-4α進行體內(nèi)外驗證;通過chip等實驗證明pgc-1α、hnf-4α在順鉑誘導(dǎo)hbv復(fù)制過程中發(fā)揮重要作用;進一步構(gòu)建pgc-1α和hnf-4α的sirna,體內(nèi)外反向驗證pgc-1α和hnf-4α是否為順鉑誘導(dǎo)hbv再激活的關(guān)鍵因子;同時通過elisa、real-timepcr、western-blot等實驗篩選內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)因子,探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與hbv再激活的相關(guān)性及其關(guān)鍵因子。實驗證實順鉑一方面可以通過直接上調(diào)hbv復(fù)制相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子pgc-1α和hnf-4α的表達(dá),增強hbv核心啟動子活性,繼而在轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)hbv的復(fù)制;另一方面可以引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,UPR(未折疊蛋白反應(yīng))誘發(fā)PGC-1α表達(dá)上調(diào),間接上調(diào)HBV復(fù)制。結(jié)論:化療藥物順鉑可以在體內(nèi)外直接增強HBV復(fù)制與轉(zhuǎn)錄從而誘導(dǎo)HBV再激活。其分子通路可能有兩條:1.PGC-1α和HNF-4α通路,肝富集轉(zhuǎn)錄因子PGC-1α和HNF-4α作為共激活因子,可以共同結(jié)合于HBV DNA增強子Ⅰ和增強子Ⅱ上,順鉑可以直接上調(diào)肝富集轉(zhuǎn)錄因子PGC-1α和HNF-4α的表達(dá),直接增強乙肝病毒的復(fù)制,引起HBV再激活;2.順鉑可以引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS),內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可以誘導(dǎo)PGC-1α表達(dá)上調(diào),間接上調(diào)HBV復(fù)制。通過對順鉑誘導(dǎo)HBV再激活分子機制的研究,我們可以找到阻斷該現(xiàn)象的藥物靶點,預(yù)防用藥降低臨床HBV再激活的發(fā)生率,改善腫瘤患者的預(yù)后和生存質(zhì)量。
【關(guān)鍵詞】：順鉑 乙肝病毒 病毒復(fù)制 HBV再激活
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R512.62
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-16
• 第一部分 乙型肝炎病毒穩(wěn)定復(fù)制小鼠模型的構(gòu)建，保種及檢測16-34
• 1 材料與方法16-25
• 2 結(jié)果25-30
• 3 討論30-34
• 第二部分HNF-4α、PGC-1α 在順鉑誘導(dǎo)HBV再激活機制中的重要作用34-52
• 1 材料與方法34-45
• 2 結(jié)果45-48
• 3 討論48-52
• 第三部分 沉默HNF-4α、PGC-1α 抑制順鉑誘導(dǎo)HBV再激活52-69
• 1 材料與方法52-60
• 2 結(jié)果60-67
• 3 討論67-69
• 第四部分 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（ERS）上調(diào)PGC-1α，間接輔助順鉑誘導(dǎo)HBV再激活69-79
• 1 材料與方法69-72
• 2 結(jié)果72-76
• 3 討論76-79
• 參考文獻(xiàn)79-83
• 全文總結(jié)83-85
• 文獻(xiàn)綜述85-94
• 參考文獻(xiàn)91-94
• 致謝94-95
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文95-96
• 攻讀碩士期間參加的學(xué)術(shù)會議96

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 María Luisa Manzano-Alonso;Gregorio Castellano-Tortajada;;Reactivation of hepatitis B virus infection after cytotoxic chemotherapy or immunosuppressive therapy[J];World Journal of Gastroenterology;2011年12期

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本文編號：635401