本文關(guān)鍵詞：TLR9-MyD88信號(hào)通路與尖銳濕疣相關(guān)性的研究

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【摘要】：目的:本研究我們將觀察TLR9及其My D88依賴途徑中重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子如My D88、IRF-7在不同預(yù)后尖銳濕疣患者皮損局部的表達(dá)情況。探討TLR9-My D88信號(hào)通路在尖銳濕疣發(fā)病機(jī)制中的作用以及它們與尖銳濕疣發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。研究結(jié)果以期為尖銳濕疣的預(yù)防、治療提供新的策略。方法:根據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)選取符合條件的15例初發(fā)和15例復(fù)發(fā)尖銳濕疣患者皮損作為實(shí)驗(yàn)組,12例健康人正常包皮作為對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組患者皮損在常規(guī)消毒鋪巾后,用2%利多卡因作局部浸潤(rùn)麻醉,切取疣體組織。對(duì)照組包皮組織是經(jīng)包皮環(huán)切術(shù)取得。所有樣本組織均經(jīng)10%中性福爾馬林固定、脫水、透明、浸蠟、包埋等步驟制成蠟塊,切片后采用免疫組織化學(xué)法在蛋白水平上分別檢測(cè)尖銳濕疣初發(fā)組、復(fù)發(fā)組及正常對(duì)照組組織中TLR 9、My D88、IRF-7的蛋白表達(dá)情況。采用FFPE樣品RNA分離試劑盒提取純化蠟塊組織中的RNA,然后用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法在基因水平上分別檢測(cè)尖銳濕疣初發(fā)組、復(fù)發(fā)組及正常對(duì)照組組織中TLR9、My D88、IRF-7的m RNA表達(dá)情況。所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS20.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述與分析。結(jié)果:1、免疫組化結(jié)果:TLR9、My D88、IRF-7在正常對(duì)照組及尖銳濕疣初發(fā)組、復(fù)發(fā)組均有不同程度表達(dá)。TLR9在對(duì)照組弱陽(yáng)性表達(dá)于基底層,在尖銳濕疣初發(fā)組,TLR9主要集中于表皮基底層、棘層、顆粒層,呈陽(yáng)性或強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),在尖銳濕疣復(fù)發(fā)組的表皮全層呈陽(yáng)性或強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。My D88在正常對(duì)照組呈弱陽(yáng)性表達(dá),且主要集中在基底層胞漿;在初發(fā)組的棘層、顆粒層、空泡細(xì)胞周圍、角質(zhì)層呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),基底層呈中等強(qiáng)度陽(yáng)性表達(dá);在復(fù)發(fā)組的基底層、棘層呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),顆粒層呈中等強(qiáng)度表達(dá)。IRF-7在正常包皮組織中主要表達(dá)于基底層胞漿,呈弱陽(yáng)性表達(dá);在初發(fā)組的棘層、角質(zhì)層呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),基底層、顆粒層呈中等強(qiáng)度陽(yáng)性表達(dá);在復(fù)發(fā)組CA皮損的棘層、顆粒層、角質(zhì)層呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),基底層呈中等強(qiáng)度表達(dá)。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示:在蛋白水平上,TLR9、My D88、IRF-7在三組中的表達(dá)均有顯著差異(P0.001)。組間比較顯示,TLR9、My D88、IRF-7在初發(fā)組及復(fù)發(fā)組的表達(dá)均顯著高于對(duì)照組(P0.05),但在初發(fā)組與復(fù)發(fā)組的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Spearman相關(guān)系數(shù)分析顯示:TLR9與My D88、TLR9與IRF-7、My D88與IRF-7均成正相關(guān)關(guān)系,而且相關(guān)程度較高(rs分別為0.907,0.916,0.876)。2、實(shí)時(shí)熒光定量PCR的結(jié)果:用Amoy Dx RNA試劑盒對(duì)FFPE樣本進(jìn)行抽提的RNA濃度在58ug/ml-118ug/ml之間,OD260/OD230比值與OD260/OD280比值均在1.8~2.0之間,1%瓊脂糖凝膠電泳分析顯示所提取的RNA完整性好。內(nèi)參基因β-actin、目的基因TLR9、My D88、IRF-7熒光定量PCR擴(kuò)增曲線呈S型,基線平滑。β-actin、TLR9、My D88、IRF-7的擴(kuò)增產(chǎn)物的熔解曲線呈單一峰,峰的形狀較銳利,系特征峰,PCR擴(kuò)增為特異性擴(kuò)增。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示:β-actin在正常對(duì)照組、初發(fā)組、復(fù)發(fā)組三組的表達(dá)相對(duì)恒定,三組間的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在基因水平上,TLR9、My D88、IRF-7分別在對(duì)照組、初發(fā)組、復(fù)發(fā)組的表達(dá)量有差異,在對(duì)照組的表達(dá)均顯著低于初發(fā)組及復(fù)發(fā)組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),但初發(fā)組與復(fù)發(fā)組的表達(dá)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(P0.05)。Pearson相關(guān)系數(shù)分析顯示:TLR9與My D88、TLR9與IRF-7、My D88與IRF-7均成正相關(guān)關(guān)系,而且有較高的相關(guān)性(r分別為0.868,0.872,0.781)。結(jié)論:1、用Amoy Dx RNA試劑盒對(duì)FFPE樣本進(jìn)行抽提的RNA濃度和純度均可,完整性好,質(zhì)量較理想。2、β-actin在正常對(duì)照組、初發(fā)組、復(fù)發(fā)組中的表達(dá)相對(duì)穩(wěn)定,β-actin可作為內(nèi)參基因以檢測(cè)TLR9、My D88、IRF-7等目的基因在三組之間的表達(dá)情況。3、不論在蛋白水平還是在基因水平,TLR9、My D88、IRF-7在尖銳濕疣患者局部皮損中均異常表達(dá),且表達(dá)程度均顯著高于正常對(duì)照組。提示高表達(dá)的TLR9可能作為HPV的識(shí)別受體,TLR9可能識(shí)別HPV病毒中的Cp G-DNA序列并激活My D88依賴途徑,引發(fā)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),激活I(lǐng)RF7等轉(zhuǎn)錄因子,調(diào)節(jié)干擾素的表達(dá),參與機(jī)體抗HPV的局部免疫反應(yīng)。但在初發(fā)組和復(fù)發(fā)組的表達(dá)無(wú)明顯差異,提示TLR9、My D88、IRF-7可能與尖銳濕疣的病程、預(yù)后無(wú)明顯關(guān)系,也可能與持續(xù)感染的HPV存在免疫逃逸而不能進(jìn)一步活化增強(qiáng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑有關(guān),還可能與標(biāo)本量較少有關(guān)。4、尖銳濕疣局部皮損中TLR9、My D88、IRF-7的表達(dá)異常,可能與機(jī)體抗HPV免疫應(yīng)答有密切關(guān)系,My D88依賴的信號(hào)通路可能在CA的發(fā)病中起著重要作用,但具體的因果關(guān)系及確切的免疫學(xué)機(jī)制尚未完全清楚,有待進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：尖銳濕疣 Toll樣受體9 髓系分化因子88 干擾素調(diào)節(jié)因子7 免疫組化 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R752.53
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 前言13-18
• 材料與方法18-28
• 結(jié)果28-40
• 討論40-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-52
• 英漢縮略詞對(duì)照表52-53
• 致謝53-55
• Toll樣受體與尖銳濕疣關(guān)系的研究進(jìn)展(綜述)55-70
• 參考文獻(xiàn)65-70

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1 劉愛美;TLR9-MyD88信號(hào)通路與尖銳濕疣相關(guān)性的研究[D];西南醫(yī)科大學(xué);2016年

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本文編號(hào)：619577