本文關(guān)鍵詞：新疆喀什地區(qū)獻血者輸血傳播布氏菌病潛在風(fēng)險評價

  更多相關(guān)文章： 布魯氏桿菌 布魯氏菌病 輸血傳播 血液安全 核酸檢測

【摘要】：背景：布氏菌病(Brucellosis,簡稱布病),是布魯氏桿菌(簡稱布氏菌)引起的急性或慢性傳染病。布氏菌病列為國家乙類傳染病,是當(dāng)今世界范圍內(nèi)尤其發(fā)展中國家流行最廣、危害最大的人獸共患傳染病之一。布病的臨床癥狀十分復(fù)雜,引起的發(fā)熱、寒顫、乏力等臨床癥狀,和肌肉或神經(jīng)性炎癥反應(yīng)等病理損害易與某些常見疾病混淆,易誤診造成慢性感染且需長程規(guī)范治療,給患者帶來極大的痛苦。自20世紀(jì)50年代開始,中國便對有布病分布和流行病學(xué)特點、發(fā)病率、死亡率和病原學(xué)以及發(fā)病機制開展了調(diào)查研究。根據(jù)中國疾病預(yù)防控制中心(CDC)公布數(shù)據(jù),2013年布病發(fā)病人數(shù)比2008年增加57%,達43486例,以每年約10%新增速度成為發(fā)病數(shù)增加最快的疾病之一。2014年中國CDC最新統(tǒng)計報告,人布病新增至57222人,死亡2例,較2013年同期發(fā)病率增長31.48%,(http://www.chinacdc.cn/tjsj/fdcrbbg/),并以多且散的點狀流行代替了大規(guī)模的暴發(fā)流行。統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示中國北方地區(qū),包括內(nèi)蒙古、黑龍江、河北、山西、吉林和新疆等省或地區(qū),布病發(fā)病率在50-1395例/100000人,造成巨大直接經(jīng)濟損失。布氏菌感染給我國公共衛(wèi)生與人們健康造成了嚴(yán)重危害,對國民經(jīng)濟帶來嚴(yán)重?fù)p失。因此,布病防控形勢極其嚴(yán)峻,布病危害有待進一步評估。布氏菌是兼性胞內(nèi)寄生菌,主要寄居在巨噬細胞和胎盤滋養(yǎng)層細胞無法被宿主徹底清除。布氏菌的天然宿主以及人布病感染源多為患病的動物,主要包括牛,綿羊,山羊,豬。此外,犬類尤其是牧羊犬,野兔,麈鹿和狐貍也可能是布氏菌的宿主和細菌傳播源。根據(jù)宿主種類不同,目前布氏菌科可分為10個種屬,其中Brucella melitensis (羊種)、Brucella abortus (牛種)、Brucella suis (豬種)、Brucella canis (犬種)和Brucella marina五種可以感染人,而B. melitensis和Brucella abortus、Brucella suis是我國感染流行的主要病原體,人布病80%以上為B. melitensis感染。布氏菌可通過消化道、呼吸道、傷口、皮膚等多種途徑入侵人體,包括協(xié)助動物分娩,接觸感染動物和畜肉,例如患布病病畜流產(chǎn)的胎盤,乳類及其制品,病畜肉類、內(nèi)臟或尸體；在某些特定環(huán)境如有病畜的養(yǎng)殖場的空氣、塵土、土壤和水源都屬于傳播危險因素,即使未接觸過病畜,但長期大量食用肉奶制品,多次進出有病畜的養(yǎng)殖場,或從事動物飼料和相關(guān)食品加工而接觸病原體也可導(dǎo)致感染。近年來,隨著人布病的逐漸增多,非職業(yè)人群的感染率也不斷上升,說明布病危害開始涉及普通人的日常生活,主要包括母嬰垂直傳播、性接觸傳播及器官移植傳播。然而,根據(jù)我國《血站技術(shù)操作規(guī)程(2012版)》規(guī)定,血液中心或血站必須在獻血前須采集獻血者血液,進行乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒、梅毒螺旋體以及ALT常規(guī)篩檢。布氏菌的輸血傳播風(fēng)險一直被人們所忽視。血液中心血液制品處于低溫保存狀態(tài),除梅毒、瘧疾、肝炎等疾病病原體在低溫下依然有感染性以外,其余病原體常被忽略,如布氏菌可以在4℃且缺乏適宜培養(yǎng)液的環(huán)境中存活6個月,尤其我國北方大部分處于布病流行地區(qū),獻血者的布氏菌感染的血液篩查卻從未開展。早在20世紀(jì)50年代已有證據(jù)顯示,可從布氏菌感染菌血癥階段的無癥狀獻血者的血液中分離出布氏菌,并通過輸注感染布氏菌的血液而導(dǎo)致受血者感染布病。2004年文獻報道,墨西哥血液中心儲存血液中布氏菌抗體檢測陽性率高達3.6%,而在布病流行地區(qū)約20%的患者處于未診斷狀態(tài),所以在布病流行地區(qū)對血液安全造成嚴(yán)重威脅。然而,我國人間布病是否經(jīng)輸血傳播的風(fēng)險目前還沒有報道,近幾年來我國布病感染人數(shù)激增,非常有必要在流行地區(qū)獻血人群中開展布氏菌篩查工作,本論文將重點研究布氏菌對血液安全的危險性,建立檢測方法,提出初步的篩查策略和建議,為輸血傳播布病的早期預(yù)防提供數(shù)據(jù),奠定基礎(chǔ),有利于布病流行地區(qū)布病的防控。本論文選取的研究對象來自于我國新疆維吾爾族自治區(qū)西南部喀什地區(qū),位于中國西北部,是一個多民族聚居的地區(qū),少數(shù)民族占總?cè)丝诘?0%以上,其中以維吾爾族人為主,且喀什地區(qū)獻血人群中90%以上為當(dāng)?shù)鼐S吾爾族人。農(nóng)牧業(yè)是該地區(qū)的第一產(chǎn)業(yè),近年來由于畜牧業(yè)迅速發(fā)展,跨地區(qū)、多途徑的牲畜交易日益頻繁,同時各地區(qū)牲畜檢驗檢疫制度不健全,造成了傳染源的輸入和輸出。另一方面,當(dāng)?shù)亟?jīng)濟較落后,農(nóng)牧民居住生活條件較差,大多數(shù)養(yǎng)殖戶布病防護意識淡薄,缺乏相應(yīng)的保護措施：這些因素都導(dǎo)致動物間、人畜間的感染機會增加。加之布病感染途徑的多樣化,使喀什地區(qū)獻血者人群因輸血傳播布病的潛在危險顯著增強,研究結(jié)果具有代表性。目前,血清學(xué)檢測與核酸檢測相結(jié)合是目前認(rèn)為降低輸血傳播疾病風(fēng)險的最佳血液篩查模式。中國北方地區(qū),尤其是在布病流行地區(qū),獻血者人群開展更加全面的血液篩查工作,并對輸血傳播的布病進行臨床相關(guān)評價,不僅利于提高血液制品的安全性,預(yù)防和減少輸血相關(guān)的布氏菌感染,還可為血液核酸篩查(NAT)應(yīng)用于獻血人群布氏菌的檢測提供更多數(shù)據(jù)支持。目的：本研究旨在針對新疆喀什地區(qū)獻血人群進行布氏菌感染調(diào)查和血液安全評價,揭示布病非職業(yè)危險人群感染與輸血傳播的潛在風(fēng)險,為我國布病高發(fā)地區(qū)制定獻血者布氏菌感染血液安全篩查策略提供重要依據(jù)。方法：1.研究對象和材料實驗組樣品來源于新疆喀什地區(qū)中心血站采集的3896份無償獻血者的血液檢測樣品；對照組樣品為深圳市血液中心的399份無償獻血者的血液檢測樣品。上述所有實驗樣品均經(jīng)過血液中心法定檢測項目的合格血液。2.實驗方法(1)初篩：乙肝表面抗原(HBsAg)膠體金試紙、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)初篩(羅氏干式生化分析儀)。(2)復(fù)檢：酶免法(EIA)進行HBsAg、HBsAg抗體,丙型肝炎病毒(HCV)抗體,HIV抗體和梅毒螺旋體檢測,ALT檢測。(3)布氏菌檢測：經(jīng)初篩和復(fù)檢所有病原體檢測呈血清學(xué)陰性和ALT值正常的標(biāo)本用于布氏菌檢測。所有樣品經(jīng)虎紅平板凝集試驗(RBPT)初篩,并進行實時熒光定量PCR (real-time qPCR)檢測,qPCR陽性樣品通過布氏菌周漿蛋白BP26基因的特異性片段Nested-PCR和基因測序進一步確認(rèn)；RBPT結(jié)果陽性的樣品進行試管凝集試驗(SAT)檢測,同時以布氏菌外膜蛋白提取物(NMPs)為抗原進行ELISA檢測,ELISA檢測陽性的樣品,利用重組布氏菌蛋白BP26、OMP31進行Western-Blot鑒定。隨訪實驗組部分布氏菌血清學(xué)檢測陽性的獻血者,進行跟蹤檢測。結(jié)果：1.獻血者布氏菌感染血清學(xué)檢測3896份樣品中135份(3.5%)被檢出RBPT陽性,后進行SAT檢測,確定120份(3.1%)為SAT陽性。以布氏菌NMPs為抗原的ELISA方法對135份RBPT陽性樣品進行檢測,39份(約1.0%)樣品OD值明顯高于Cut-off值(0.262)。進一步利用布氏菌重組蛋白rBP26、rOMP 31 Western-Blot檢測39份NMPs-ELISA陽性的樣品,其中25份可以與rBP26和(或)rOMP31反應(yīng),確定血清中含有布氏菌相應(yīng)抗體,且rBP26的反應(yīng)性明顯強于rOMP31。3896份樣品的布氏菌抗體EIA檢測陽性率為0.64%(25/3896)。2.獻血者跟蹤檢測截止2013年年底,僅獲得43號、115號兩份隨訪血樣,距離首次獻血采血時間分別為145天,110天。兩份血樣RBPT和SAT檢測結(jié)果均為陽性,但全自動細菌檢測系統(tǒng)檢測結(jié)果顯示血培養(yǎng)陰性；43號隨訪樣品與rBP26、rOMP31的Western-Blot檢測均為陽性可確定該獻血者血液樣品中含有布氏菌抗體；115號隨訪樣品與rBP26、rOMP31的Western-Blot檢測陰性,但兩份血樣nested PCR均為陽性且測序正確,因此不能排除隨訪樣品115號中不含有其他種類的布氏菌抗體。3.獻血者布氏菌核酸檢測用qPCR對135份RBPT陽性的血液樣品進行初步布氏菌核酸檢測。14份(0.36%)樣品qPCR結(jié)果陽性,其中13份樣品通過Nested-PCR檢測和測序確定含有布氏菌特異性核酸片段BP26 DNA,另兩份隨訪血液樣品都能檢測出布氏菌DNA。因此,135份RBPT陽性樣品中,15份(0.39%)樣品檢出含有布氏菌DNA且通過測序確定為布氏菌BP26基因片段。4.布氏菌檢測方法比較15份布氏菌DNA檢測陽性樣品,RBPT、SAT、ELISA、Western-Blot及qPCR五種布氏菌檢測方法的檢出率分別為100%、87%、73%、40%和87%,五種檢測方法檢測出的病原體陽性率分別為11.1%,10.83%,30.8%,28%和92.9%,由此可見,RBPT靈敏度較高,特異性較低,可用于布病初篩,聯(lián)合其他檢測方法進行確認(rèn)鑒定。5.獻血者流行病學(xué)分析2010年1月1日-2013年5月5日新疆喀什地區(qū)中心血站采集的40502份無償獻血者血液樣品HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-Syphilis檢出率分別為1.3%,0.51%,0.16%,0.44%。本實驗布氏菌抗體陽性135份,檢出率為3.5%,0.64%的樣品通過rBP26及rOMP31 Western-Blot確定檢出相應(yīng)的布氏菌抗體；布氏菌DNA檢出率為0.39%。男性布氏菌感染率明顯高于女性；漢族人(36%)布氏菌感染率約占總體感染率50%,明顯高于維族人；RBPT和SAT檢測陽性樣品中,約4%-5%的獻血者年齡集中在36-45歲；18%-40%布氏菌感染與職業(yè)危險因素相關(guān)。結(jié)論：1.新疆喀什地區(qū)獻血人群中,布氏菌抗體檢測陽性率約3.5%,核酸檢測陽性率約0.39%,提示我國新疆喀什地區(qū)布病非職業(yè)危險人群感染與輸血傳播的潛在風(fēng)險。2.建議在我國布病流行地區(qū)開展布氏菌的血液篩查以提高血液安全,并進行更加全面的評價和追蹤調(diào)查,為輸血傳播布病的防控提供數(shù)據(jù)支持。3.RBPT檢測的靈敏度高且快捷簡便,可作為布氏菌血液初篩的主要檢測方法。建議以RBPT和布氏菌核酸檢測(NAT)技術(shù)相結(jié)合的檢測模式,開展布氏菌血液篩查。
【關(guān)鍵詞】：布魯氏桿菌 布魯氏菌病 輸血傳播 血液安全 核酸檢測
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R516.7
【目錄】：

• 摘要3-9
• ABSTRACT9-18
• 前言18-33
• 0.1 布魯桿菌及布魯氏菌病的發(fā)現(xiàn)19-20
• 0.2 布氏菌基本生物學(xué)特性20-21
• 0.3 布氏菌感染機制及宿主免疫應(yīng)答21-23
• 0.4 人布氏菌病感染源與感染途徑23-25
• 0.5 我國布病流行病學(xué)特征25-26
• 0.6 臨床特征及診斷26-30
• 0.7 布氏菌病的防控30
• 0.8 本研究目的及意義30-33
• 1 材料33-37
• 1.1 研究對象33
• 1.2 主要試劑33-34
• 1.3 主要試劑配制34-36
• 1.4 主要儀器36
• 1.5 引物合成36-37
• 2 方法37-45
• 2.1 布菌外膜蛋白(NMPs)提取37
• 2.2 血清學(xué)標(biāo)志物檢測37-41
• 2.3 樣品核酸檢測41-44
• 2.4 軟件44
• 2.5 統(tǒng)計學(xué)分析44-45
• 3 結(jié)果45-53
• 3.1 獻血者布氏菌抗體反應(yīng)性檢測45-46
• 3.2 獻血者隨訪檢測46-47
• 3.3 獻血者布氏菌核酸檢測47-48
• 3.4 布氏菌檢測方法比較48-49
• 3.5 獻血者流行病學(xué)分析49-53
• 4 討論53-58
• 5 小結(jié)58-59
• 參考文獻59-67
• 攻讀學(xué)位期間成果67-69
• 縮略詞69-71
• 附錄71-79
• 致謝79-81

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 王承芳;曾政;索勛;;布魯氏菌抗感染免疫研究進展[J];中國動物檢疫;2009年03期

2 林超波;黃維國;譚華;;2013年新疆第六師布氏菌病監(jiān)測結(jié)果分析[J];現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué);2014年24期

，

本文編號：614002