本文關(guān)鍵詞：細(xì)胞自噬及代謝相關(guān)因素在HIV-1 Tat激活中的作用機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： Tat 自噬 M2型丙酮酸激酶 腺苷酸活化蛋白激酶 丹參酮II A

【摘要】：人類免疫缺陷病毒(HIV-1)是引起獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDS)的逆轉(zhuǎn)錄病毒。轉(zhuǎn)錄激活因子Tat蛋白由HIV-1 tat基因編碼,可以反式激活HIV-1的長(zhǎng)末端重復(fù)序列,在調(diào)控HIV-1基因的表達(dá)以及生命周期的過(guò)程中有重要作用,已經(jīng)成為抗HIV-1治療中的一個(gè)新的潛在靶點(diǎn)。目前,研究發(fā)現(xiàn)自噬及細(xì)胞代謝狀態(tài)在病毒感染過(guò)程中有重要作用。本課題主要研究自噬及代謝相關(guān)因素在HIV-1 Tat反式激活中的作用及分子機(jī)制。丹參酮II A是從傳統(tǒng)中藥丹參中提煉而來(lái)的,它在包括抗腫瘤,抗氧化,抗病毒及抗突變等多種生命活動(dòng)中發(fā)揮重要作用。本課題還探索了傳統(tǒng)中藥中的有效成分丹參酮II A對(duì)代謝的影響,及其對(duì)HIV-1 Tat反式激活的影響和涉及的信號(hào)通路。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,HIV-1 Tat可以通過(guò)提高蛋白激酶B(Akt)及雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的磷酸化水平來(lái)激活A(yù)kt/mTOR通路,從而抑制自噬相關(guān)蛋白ATG7,ATG 5及Beclin 1的表達(dá),PI3K(磷脂酰肌醇3羥激酶)/Akt/mTOR信號(hào)通路抑制劑雷帕霉素(RAPA)和3-甲基腺嘌呤(3-MA)可以逆轉(zhuǎn)此過(guò)程。同時(shí),代謝相關(guān)因素M2型丙酮酸激酶(PKM2)及單磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)可以通過(guò)作用于Akt/mTOR通路改變細(xì)胞自噬的程度:PKM2表達(dá)的降低以及AMPK激活劑AICAR引起的AMPK的活化可以下調(diào)Akt和/或mTOR的磷酸化,抑制Akt/mTOR通路,促進(jìn)自噬相關(guān)蛋白ATG 7,ATG 5及Beclin 1的表達(dá),而AMPK的敲除則在上述過(guò)程中發(fā)揮相反的作用。雷帕霉素,3-甲基腺嘌呤,PKM2的敲除及AMPK的活化會(huì)抑制HIV-1 Tat激活;AMPK的敲除會(huì)逆轉(zhuǎn)此過(guò)程。由此可見(jiàn),PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路,PKM2及AMPK通過(guò)對(duì)自噬的調(diào)控作用于HIV-1 Tat的反式激活。丹參酮II A作為一個(gè)典型的抗氧化劑,通過(guò)促進(jìn)促進(jìn)核因子E2相關(guān)因子2(Nrf2)的表達(dá)來(lái)改變細(xì)胞內(nèi)的氧化還原狀態(tài),逆轉(zhuǎn)Tat引起的活性氧(ROS)的產(chǎn)生及谷胱甘肽(GSH)水平的下降。在細(xì)胞中,Tat可以抑制沉默信息調(diào)節(jié)子2類似物1(SIRT1)蛋白的表達(dá)及活性,丹參酮II A的作用可以提高SIRT1蛋白的活性,但此過(guò)程并不涉及SIRT1蛋白表達(dá)的改變。同時(shí),Tat可以抑制尼克酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(Nampt)蛋白的表達(dá),并加快煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的消耗,丹參酮II A以劑量依賴的形式逆轉(zhuǎn)此過(guò)程;且丹參酮II A的這一作用是通過(guò)提高AMPK的磷酸化水平,激活A(yù)MPK信號(hào)通路介導(dǎo)的。最終,丹參酮II A通過(guò)氧化還原調(diào)控AMPK-Nampt-SIRT1通路抑制了HIV-1 Tat的反式激活。綜上所述,自噬參與調(diào)控了HIV-1 Tat的反式激活,而代謝相關(guān)因素可以通過(guò)調(diào)控自噬及Nampt-SIRT1通路來(lái)作用于HIV-1 Tat的激活。從自噬以及代謝的角度出發(fā),更加深入地了解宿主細(xì)胞-病毒之間相互作用,為我們從另一個(gè)新的角度研究抗病毒策略,發(fā)展新型抗病毒藥物提供了新的方向。
【關(guān)鍵詞】：Tat 自噬 M2型丙酮酸激酶 腺苷酸活化蛋白激酶 丹參酮II A
【學(xué)位授予單位】：北京工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R512.91
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 英文縮寫詞8-13
• 第1章 緒論13-27
• 1.1 HIV-1 概況13-16
• 1.1.1 HIV-1 Tat13-14
• 1.1.2 艾滋病治療現(xiàn)狀14-16
• 1.2 細(xì)胞自噬16-20
• 1.2.1 細(xì)胞自噬概述16
• 1.2.2 自噬的分類16-17
• 1.2.3 自噬的發(fā)生17-18
• 1.2.4 細(xì)胞自噬與病毒感染研究進(jìn)展18-20
• 1.3 細(xì)胞代謝20-25
• 1.3.1 糖酵解20-21
• 1.3.2 M2型丙酮酸激酶（PKM2）21-22
• 1.3.3 AMPK22-23
• 1.3.4 代謝對(duì)自噬的調(diào)控23-24
• 1.3.5 病毒感染與細(xì)胞代謝的相互作用24-25
• 1.4 研究意義25-27
• 第2章 細(xì)胞自噬及代謝調(diào)控的自噬在HIV-1 Tat反式激活中的作用機(jī)制研究27-55
• 2.1 引言27-28
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料28-31
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑的配制28-29
• 2.2.2 主要儀器29-30
• 2.2.3 試劑及耗材30
• 2.2.4 引物的設(shè)計(jì)、合成30
• 2.2.5 菌株及質(zhì)粒30-31
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法31-37
• 2.3.1 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化及甘油菌制備31
• 2.3.2 質(zhì)粒提取及鑒定31-33
• 2.3.3 細(xì)胞培養(yǎng)33
• 2.3.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染33-34
• 2.3.5 Real-time PCR檢測(cè)34-35
• 2.3.6 Western Blot檢測(cè)35-36
• 2.3.7 MAGI實(shí)驗(yàn)36-37
• 2.3.8 統(tǒng)計(jì)分析處理方法37
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-52
• 2.4.1 HIV-1 Tat及PI3K/Akt/mTOR通路抑制劑對(duì)自噬的影響37-41
• 2.4.2 Tat對(duì)Akt/mTOR信號(hào)通路的作用41-42
• 2.4.3 PKM2對(duì)自噬及Akt/mTOR信號(hào)通路的影響42-46
• 2.4.4 AMPK對(duì)自噬及Akt/mTOR信號(hào)通路的影響46-51
• 2.4.5 PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路抑制劑、PKM2及AMPK對(duì)HIV-1 Tat反式激活的影響51-52
• 2.5 討論52-54
• 2.6 本章小結(jié)54-55
• 第3章 丹參酮II A氧化還原調(diào)控AMPK/Nampt通路從而抑制HIV-1 Tat激活55-67
• 3.1 引言55
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料55-56
• 3.2.1 試劑及耗材55-56
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法56-58
• 3.3.1 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化及甘油菌制備56
• 3.3.2 質(zhì)粒提取及鑒定56
• 3.3.3 細(xì)胞培養(yǎng)56
• 3.3.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染56
• 3.3.5 NAD+及NAD+/NADH比值檢測(cè)56-57
• 3.3.6 細(xì)胞內(nèi)GSH水平檢測(cè)57
• 3.3.7 ROS檢測(cè)57
• 3.3.8 SIRT1活性檢測(cè)57-58
• 3.3.9 Real-time PCR58
• 3.3.10 western blot58
• 3.3.11熒光素酶檢測(cè)58
• 3.3.12統(tǒng)計(jì)分析處理方法58
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果58-65
• 3.4.1 Tat及丹參酮IIA對(duì)細(xì)胞內(nèi)氧化還原狀態(tài)的影響58-60
• 3.4.2 Tat及丹參酮II A對(duì)SIRT1的影響60-61
• 3.4.3 丹參酮II A對(duì)Tat處理的細(xì)胞中Nampt表達(dá)及NAD+水平的影響61-62
• 3.4.4 丹參酮II A誘導(dǎo)的Nampt的表達(dá)由AMPK通路介導(dǎo)62-64
• 3.4.5 丹參酮II A通過(guò)AMPK-Nampt通路抑制HIV-1 Tat的反式激活64-65
• 3.5 討論65-66
• 3.6 本章小結(jié)66-67
• 結(jié)論67-69
• 參考文獻(xiàn)69-77
• 攻讀碩士學(xué)位期間所發(fā)表的學(xué)術(shù)論文77-79
• 致謝79

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1 王定邦,劉愛(ài)生;丹參酮治療痤瘡的初步報(bào)告[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);1980年03期

2 房其年;;丹參酮的制備[J];赤腳醫(yī)生雜志;1980年03期

3 王定邦;;丹參酮治療痤瘡[J];中醫(yī)雜志;1982年11期

4 劉肖林,王臨海,張汝敏;丹參酮對(duì)絕經(jīng)后婦女冠心病過(guò)氧化物及脂質(zhì)代謝的影響[J];心血管康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志;2000年04期

5 孔曉紅,宋光明;丹參酮治療痤瘡的臨床研究[J];中國(guó)廠礦醫(yī)學(xué);2001年06期

6 吳冠倫;小劑量丹參酮治療痤瘡120例分析[J];徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2005年04期

7 陸子遺;江石民;;丹參酮臨床驗(yàn)證[J];江蘇醫(yī)藥;1978年02期

8 鄭彩霞;;丹參酮軟膏治療外科感染[J];赤腳醫(yī)生雜志;1979年11期

9 石紅喬;丹參酮臨床應(yīng)用舉隅[J];山西中醫(yī);2000年04期

10 姚建國(guó),蔣永紅,周卯星,馮瑜;超臨界二氧化碳萃取丹參中的丹參酮[J];山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2003年01期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 許雯;陳斐;張世忠;夏強(qiáng);;線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔在丹參酮-ⅡA心肌保護(hù)中的作用[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)第五屆全國(guó)心血管、呼吸和腎臟生理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2005年

2 劉先瓊;許臘英;劉艷菊;;丹參不同直徑丹參酮IIA的含量測(cè)定[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)四大懷藥與地道藥材研究論壇暨中藥炮制分會(huì)第二屆第五次學(xué)術(shù)會(huì)與第三屆會(huì)員代表大會(huì)論文集[C];2007年

3 張釗;陳乃宏;;丹參酮抗癌作用及其研究進(jìn)展[A];第三屆中國(guó)藥理學(xué)會(huì)補(bǔ)益藥藥理專業(yè)委員會(huì)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2013年

4 王永劍;;丹參酮對(duì)離體肺保護(hù)的免疫調(diào)節(jié)[A];第五屆全國(guó)災(zāi)害醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨常州市醫(yī)學(xué)會(huì)急診危重病及災(zāi)害醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會(huì)首屆年會(huì)學(xué)術(shù)論文集[C];2009年

5 王永劍;;丹參酮對(duì)離體肺保護(hù)的免疫調(diào)節(jié)[A];2008全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合危重病、急救醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議學(xué)術(shù)論文集[C];2008年

6 陸新良;;丹參酮IIA對(duì)胰腺癌的抑制作用[A];2013第六屆浙江省消化病學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2013年

7 談平;;丹參酮2A磺酸鈉注射液對(duì)原發(fā)性腎病綜合征腎功能、血脂的影響[A];第十九次全國(guó)中醫(yī)腎病學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2006年

8 鄒建安;徐久平;邵明峰;趙藹峰;;丹參酮治療慢性非細(xì)菌性前列腺炎臨床研究(附31例報(bào)告)[A];第五次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合泌尿外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2005年

9 王永劍;;丹參酮對(duì)離體肺保護(hù)的免疫調(diào)節(jié)[A];第四屆全國(guó)災(zāi)害醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨第二屆“華森杯”災(zāi)害醫(yī)學(xué)優(yōu)秀學(xué)術(shù)論文評(píng)審會(huì)學(xué)術(shù)論文集[C];2007年

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中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 張進(jìn)川;丹參酮IIA研究獲河南科技進(jìn)步獎(jiǎng)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2004年

2 鄭州市第三人民醫(yī)院 陳錦屏;用中藥先查“籍貫”[N];健康報(bào);2007年

3 江蘇 應(yīng)明春;單味中藥治“硬化”[N];民族醫(yī)藥報(bào);2002年

4 南方醫(yī)科大學(xué)教授 羅仁;單方祛痤瘡[N];健康報(bào);2008年

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1 李鉑;丹參近緣種成分差異及毛狀根中丹參酮積累調(diào)控研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳薪宇;細(xì)胞自噬及代謝相關(guān)因素在HIV-1 Tat激活中的作用機(jī)制研究[D];北京工業(yè)大學(xué);2015年

2 謝曉燕;丹參酮IIA磺酸鈉在海水淹溺性肺水腫中的作用及其機(jī)制[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2011年

3 肖晗;丹參酮IIA在不同時(shí)間點(diǎn)給藥對(duì)大鼠腦缺血模型再灌注損傷的神經(jīng)保護(hù)作用研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2014年

4 段楠;丹參酮影響潰瘍性結(jié)腸炎患者血小板活化的研究[D];泰山醫(yī)學(xué)院;2014年

5 和志剛;丹參酮對(duì)頸內(nèi)動(dòng)脈支架成形術(shù)患者圍手術(shù)期高敏C反應(yīng)蛋白及血瘀證積分的影響[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2012年

6 楊柳;低分子右旋糖酐、丹參酮對(duì)術(shù)后急性血栓栓塞預(yù)防的臨床研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2006年

7 張東梅;丹參酮IIA及抗IGFBP7（rP1）抗體護(hù)肝機(jī)制的體外實(shí)驗(yàn)研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2008年

8 黃浩;丹參酮對(duì)LPS誘導(dǎo)NF-κB活性增加的拮抗作用及其機(jī)理初探[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2004年

9 行俊秀;丹參酮對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞胰島素抵抗下IRS-1、p-ERK表達(dá)的影響[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2007年

10 李春苗;1-氧次丹參酮的全合成研究[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：542664