本文關(guān)鍵詞：新型艾滋病疫苗控制SIV病毒感染恒河猴的保護(hù)機(jī)制探索，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：艾滋病(HIV)流行已經(jīng)嚴(yán)重威脅人類健康和社會穩(wěn)定,它已造成了數(shù)千萬人的死亡,仍有超過3000萬的存活者忍受著艾滋病的折磨。而且,平均每天仍有約15000個新增感染者,但至今人們未研發(fā)出一種安全有效的艾滋病疫苗。由于艾滋病的主要傳播渠道之一是通過性傳播,而且腸道黏膜儲存著大量的激活的CD4+T淋巴細(xì)胞.所以開發(fā)一種能夠預(yù)防HIV感染,特別是預(yù)防黏膜感染的HIV疫苗,已成為一件迫切的科學(xué)問題。經(jīng)過本實驗室人員多年的努力,我們的研究團(tuán)隊已開發(fā)一種天壇株痘病毒(MVTT)載體疫苗初免/腺病毒載體疫苗加強(qiáng)免疫的黏膜免疫策略,這種疫苗策略在獼猴體內(nèi)能夠引起強(qiáng)烈的、穩(wěn)定的、持續(xù)的細(xì)胞免疫。更為重要的是這種策略可以保護(hù)經(jīng)黏膜途徑感染的猴子,在急性感染期和慢性感染期對病毒的復(fù)制都有很好的免疫控制,并延緩了艾滋病的發(fā)展進(jìn)程。然而我們并不清楚該疫苗的保護(hù)機(jī)制。本論文我試圖闡述其可能的黏膜保護(hù)機(jī)制。首先我們發(fā)現(xiàn)該疫苗策略可以減少腸道CD4+T的丟失,與保護(hù)效果呈相關(guān)性。其次我們檢測了細(xì)胞因子的表達(dá),抗體的表達(dá)水平,并搜集了猴的腸道組織和腸道相關(guān)的淋巴組織,用HE染色,免疫組化染色,熒光定量的等檢測方法試從形態(tài)學(xué)病理學(xué),病毒學(xué),免疫學(xué)等方法去深入探索其中的保護(hù)免疫機(jī)制。我們的實驗數(shù)據(jù)表明,我們的該黏膜免疫策略可以減少腸道淋巴細(xì)胞的丟失,減少腸道表皮的破壞,減少SIV病毒的儲存庫,這些數(shù)據(jù)也表明我們的疫苗策略誘發(fā)了有效的黏膜免疫應(yīng)答,并起到了良好的黏膜保護(hù)效果。我們的研究為進(jìn)一步證明腸道黏膜在控制SIV感染中發(fā)揮重要的作用提供了強(qiáng)有力的數(shù)據(jù)支持,也將為以后研發(fā)更有效的黏膜疫苗奠定了理論基礎(chǔ)和借鑒作用。
【關(guān)鍵詞】：艾滋病 疫苗 黏膜 機(jī)制
【學(xué)位授予單位】：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R512.91
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-11
• 第1章 緒論11-21
• 1.1 人類免疫缺陷病毒(HIV)及艾滋病簡介11-16
• 1.1.1 艾滋病的流行是全球公共衛(wèi)生事業(yè)的巨大挑戰(zhàn)11-12
• 1.1.2 HIV的起源與進(jìn)化12-13
• 1.1.3 HIV/SIV的形態(tài)結(jié)構(gòu)與基因組組成13-14
• 1.1.4 HIV感染機(jī)體和艾滋病的進(jìn)展過程14-16
• 1.2 黏膜免疫疫苗的開發(fā)與HIV的預(yù)防與控制16-21
• 1.2.1 黏膜是HIV病毒感染的主要門戶16-17
• 1.2.2 HIV通過黏膜侵入機(jī)體17-18
• 1.2.3 HIV入侵黏膜系統(tǒng)的危害18-19
• 1.2.4 艾滋病疫苗的研發(fā)現(xiàn)狀19-20
• 1.2.5 本課題的工作-新型艾滋病疫苗控制SIV病毒感染恒河猴的保護(hù)機(jī)制探索20-21
• 第2章 實驗材料與方法21-41
• 2.1 痘病毒載體與腺病毒載體聯(lián)合免疫21-22
• 2.1.1 實驗試劑及材料21
• 2.1.2 恒河猴免疫的實驗方法21-22
• 2.2 實時定量PCR檢測血漿中SIV病毒載量22-25
• 2.2.1 實驗試劑及材料22-23
• 2.2.2 分離猴血漿23
• 2.2.3 SIV血漿病毒基因組的提取23-24
• 2.2.4 RNA標(biāo)準(zhǔn)品的制備24
• 2.2.5 實時定量PCR檢測血漿中SIV病毒載量24-25
• 2.3 酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)(ELISPOT)檢測IFN-Γ因子的水平25-29
• 2.3.1 實驗材料及試劑25-26
• 2.3.2 R10完全培養(yǎng)基的配置26
• 2.3.3 SIV多肽的溶解保存26
• 2.3.4 恒河猴血漿PBMC(Peripheral blood mononuclear cell)的分離和計數(shù)26-27
• 2.3.5 恒河猴淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞的制備27
• 2.3.6 恒河猴血漿PBMC凍存27
• 2.3.7 ELISPOT檢測IFN-γ分泌操作步驟27-29
• 2.3.8 ELISPOT結(jié)果分析方法29
• 2.4 流式分析細(xì)胞表型29-30
• 2.4.1 實驗材料與試劑29
• 2.4.2 流式分析細(xì)胞表型操作步驟29-30
• 2.5 酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清中SIV特異性的結(jié)合抗體30-32
• 2.5.1 實驗材料及試劑30
• 2.5.2 SIVmac239病毒的擴(kuò)增30
• 2.5.3 超速離心的方法純化濃縮SIVmac23930-31
• 2.5.4 制備SIVmac239全病毒裂解液31
• 2.5.5 ELISA檢測血漿中SIV特異性的結(jié)合抗體的操作31-32
• 2.6 胞內(nèi)細(xì)胞因子染色法檢測多功能T細(xì)胞32-33
• 2.6.1 實驗儀器及材料32
• 2.6.2 所需試劑的配制32
• 2.6.3 胞內(nèi)細(xì)胞因子染色操作步驟32-33
• 2.7 Luminex檢測猴血清中細(xì)胞因子的表達(dá)33-34
• 2.7.1 實驗材料及試劑33-34
• 2.7.2 Luminex操作步驟34
• 2.8 石蠟包埋和HE染色(hematoxylin-eosin staining)34-35
• 2.8.1 實驗材料及試劑34
• 2.8.2 石蠟包埋和HE染色操作34-35
• 2.9 免疫組化35-37
• 2.9.1 實驗材料及試劑35-36
• 2.9.2 免疫組化操作方法36-37
• 2.9.4 免疫組化注意事項37
• 2.10 組織中SIV整合基因的定量37-41
• 2.10.1 實驗材料及試劑37-38
• 2.10.2 組織基因組提取38-39
• 2.10.3 DNA標(biāo)準(zhǔn)品的制備39
• 2.10.4 Q-PCR定量組織中SIV DNA病毒載量39-41
• 第3章 結(jié)果與分析41-65
• 3.1 我們的疫苗策略能夠預(yù)防SIV的感染41-43
• 3.2 該疫苗產(chǎn)生的免疫應(yīng)答降低了恒河猴體內(nèi)的血漿病毒載量43-45
• 3.3 血液指標(biāo)初步證明該疫苗能夠控制腸道CD4+T細(xì)胞的丟失45-47
• 3.4 猴腸道組織及其相關(guān)淋巴結(jié)結(jié)構(gòu)觀察47-60
• 3.4.1 本文部分試驗猴猴發(fā)病癥狀觀察記錄47
• 3.4.2 該疫苗能夠減緩淋巴結(jié)的結(jié)構(gòu)破壞47-51
• 3.4.3 該疫苗能夠維持淋巴結(jié)中B細(xì)胞的正常分布51-53
• 3.4.4 該疫苗能夠控制獼猴淋巴結(jié)中T細(xì)胞的丟失53-55
• 3.4.5 該疫苗能有效促進(jìn)和維持淋巴濾泡內(nèi)細(xì)胞增殖55-57
• 3.4.6 死于艾滋病的獼猴腸道結(jié)構(gòu)變化的觀察57-60
• 3.5 該疫苗可以降低SIV病毒儲存庫60-63
• 3.6 實驗結(jié)果總結(jié)63-65
• 第4章 問題與討論65-67
• 參考文獻(xiàn)67-75
• 附錄1 縮略詞75
• 附錄2 申明75
• 附錄3 倫理申明75-77
• 致謝77-79
• 在學(xué)期間已發(fā)表或取得的其他取得的其他研究成果79

【共引文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 簡麗;猿腺病毒6型和7型血清中和抗體在中國人群中的流行病學(xué)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2014年

  本文關(guān)鍵詞：新型艾滋病疫苗控制SIV病毒感染恒河猴的保護(hù)機(jī)制探索，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：502673