本文關(guān)鍵詞：公共引物介導(dǎo)的多重PCR技術(shù)在細(xì)菌性腦膜炎診斷中的應(yīng)用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分：一種高效篩選公共引物的方法目的：設(shè)計(jì)一種篩選公共引物的方法。方法：將3條正向引物和3條反向引物序列連接于一段人類β-actin基因序列兩端,將連接片段導(dǎo)入pMD19-T載體構(gòu)建重組質(zhì)粒,利用此質(zhì)粒模板進(jìn)行9對(duì)引物的敏感性檢測(cè)。步驟包括：引物設(shè)計(jì)、插入序列的選擇、酶切轉(zhuǎn)化、質(zhì)粒提取、敏感性檢測(cè)。結(jié)果：區(qū)別9對(duì)公共引物的敏感性,篩選出靈敏性較高的公共引物對(duì)。結(jié)論：該方法操作簡(jiǎn)單、高效和快速,可用于公共引物的高效篩選。第二部分：篩選檢測(cè)細(xì)菌性腦膜炎的公共引物目的：篩選出一條適用于細(xì)菌性腦膜炎檢測(cè)的多重PCR體系的公共引物。方法：通過(guò)特異性比較,挑選出3條公共引物。運(yùn)用高效篩選公共引物的方法,對(duì)3對(duì)公共引物進(jìn)行敏感性檢測(cè)。結(jié)果：UP1、UP2和UP3的特異性均較高,但敏感性分別為10~2,10~6,10~3拷貝。結(jié)論：本次實(shí)驗(yàn)篩選出的UP1可優(yōu)先用于多重PCR體系的構(gòu)建。第三部分：細(xì)菌性腦膜炎多重PCR檢測(cè)體系的設(shè)計(jì)與鑒定目的：以導(dǎo)致細(xì)菌性腦膜炎的常見(jiàn)六種細(xì)菌為檢測(cè)靶標(biāo),建立新型具有高通量的“公共引物”介導(dǎo)的多重PCR檢測(cè)體系,研發(fā)適用于臨床的細(xì)菌性腦膜炎的檢測(cè)試劑盒。方法：包括三部分：(1)質(zhì)粒模板的構(gòu)建：對(duì)目的模板和載體雙酶切以后連接轉(zhuǎn)化,重組質(zhì)粒進(jìn)行菌落PCR和測(cè)序鑒定；(2)多重體系的建立：設(shè)計(jì)特異性引物和嵌合引物；確定擴(kuò)增體系和反應(yīng)條件；體系特異性檢測(cè)；體系敏感性檢測(cè)；(3)臨床標(biāo)本的檢測(cè)：提取CSF基因組DNA,用構(gòu)建的UP-M-PCR體系進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：嵌合引物和UP-M-PCR體系擴(kuò)增靶標(biāo)序列時(shí)無(wú)非特異性帶產(chǎn)生,S. agalactiae, L. monocytogenes, S. pneumoniae, N. meningitis, H. influenza和S.aureu的多重體系敏感性檢測(cè)結(jié)果分別為10~2,10~3,10,10~2,10~2和10~4拷貝。運(yùn)用UP-M-PCR體系進(jìn)行臨床標(biāo)本的檢測(cè)時(shí),成功檢出3例標(biāo)本。結(jié)論：本課題構(gòu)建的UP-M-PCR檢測(cè)體系具有較高的特異性和敏感性,可用于檢測(cè)細(xì)菌性腦膜炎病原體的檢測(cè),具有臨床應(yīng)用價(jià)值。
【關(guān)鍵詞】：細(xì)菌性腦膜炎 多重PCR 公共引物 引物篩選
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R515.2;R440
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 研究背景9-14
• 參考文獻(xiàn)10-14
• 第一部分 一種高效篩選公共引物的方法14-29
• 材料和方法14-23
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-26
• 討論26-27
• 參考文獻(xiàn)27-29
• 第二部分 篩選檢測(cè)細(xì)菌性腦膜炎的公共引物29-42
• 材料和方法30-36
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-40
• 討論40
• 參考文獻(xiàn)40-42
• 第三部分 細(xì)菌性腦膜炎多重PCR檢測(cè)體系的設(shè)計(jì)與鑒定42-58
• 材料和方法42-48
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果48-52
• 討論52-55
• 參考文獻(xiàn)55-58
• 結(jié)論58-59
• 綜述腦炎常見(jiàn)病原體分析及臨床輔助檢查方法59-70
• 參考文獻(xiàn)67-70
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文、科研成果70-71
• 附錄71-73
• 致謝73

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 Van De Beek D.,De Gans J. ,Spanjaard L. ,黃衛(wèi)東;成人細(xì)菌性腦膜炎的臨床特點(diǎn)和預(yù)后因素[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(神經(jīng)病學(xué)分冊(cè));2005年03期

2 高寶紅;師永紅;;反復(fù)發(fā)作細(xì)菌性腦膜炎診治體會(huì)[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2006年02期

3 王明琦;李廣生;;細(xì)菌性腦膜炎早期合理治療的臨床探討(附164例報(bào)告)[J];贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2007年01期

4 李穎;汪復(fù);;肺炎鏈球菌結(jié)合疫苗能降低細(xì)菌性腦膜炎發(fā)病率[J];中國(guó)感染與化療雜志;2009年02期

5 李文輝;周琴;;部分治療后細(xì)菌性腦膜炎20例臨床分析[J];當(dāng)代醫(yī)學(xué);2009年32期

6 任紅宇;安淑一;李馬超;徐麗;朱兵清;邵祝軍;;細(xì)菌性腦膜炎多重聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)方法的研究[J];中國(guó)疫苗和免疫;2010年01期

7 唐宇鳳;段勁峰;馮由軍;;成人不典型細(xì)菌性腦膜炎16例臨床分析[J];實(shí)用醫(yī)院臨床雜志;2013年02期

8 盧觀巨,陳作韜;多次患細(xì)菌性腦膜炎2例報(bào)告[J];新醫(yī)學(xué);1975年01期

9 李清輝;小兒時(shí)期細(xì)菌性腦膜炎(在診斷和治療方面一些重要而易失察的問(wèn)題)[J];武漢醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1976年01期

10 楊于嘉;診治兒童細(xì)菌性腦膜炎易犯的錯(cuò)誤[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)參考資料.神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)分冊(cè);1976年03期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 彭鏡;張紅媛;甘娜;尹飛;;兒童細(xì)菌性腦膜炎的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十四次全國(guó)兒科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

2 李玲;水泉祥;;腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子在實(shí)驗(yàn)性細(xì)菌性腦膜炎神經(jīng)保護(hù)作用的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十四次全國(guó)兒科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

3 謝永強(qiáng);鄧秋連;虢艷;黃勇;鐘玉葵;;兒童細(xì)菌性腦膜炎的病原學(xué)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第四次全國(guó)感染性疾病中青年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

4 陸中權(quán);張信良;賈玉雙;溫懷凱;;新生兒細(xì)菌性腦膜炎腦脊液一氧化氮檢測(cè)臨床意義[A];全國(guó)圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)專題學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2007年

5 張星虎;劉鳳芹;趙志剛;;冰片開(kāi)放血腦屏障對(duì)實(shí)驗(yàn)性細(xì)菌性腦膜炎治療影響的研究[A];第九次全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2006年

6 陳勇川;朱衛(wèi)民;;細(xì)菌性腦膜炎的抗菌藥物治療進(jìn)展[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)化療藥理專業(yè)委員會(huì)第九屆學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2008年

7 李強(qiáng);楊勤;靳蓉;黃景霞;劉亮;;細(xì)菌性腦膜炎和病毒性腦炎患兒腦脊液及血清相關(guān)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)的意義[A];2013年貴州省兒科學(xué)術(shù)年會(huì)暨兒科常見(jiàn)疑難重癥診治繼續(xù)教育學(xué)習(xí)班論文集[C];2013年

8 劉玉明;耿榮;劉剛;;小兒肺炎鏈球菌腦膜炎98例臨床及不良預(yù)后因素分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)急診醫(yī)學(xué)分會(huì)第十六次全國(guó)急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2013年

9 劉秀麗;劉艷;別旭;華娜;王慧;;腦膜炎耳聾的患病調(diào)查及內(nèi)耳影像學(xué)觀察[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國(guó)耳鼻咽喉-頭頸外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（上）[C];2007年

10 何偉;;細(xì)菌性腦膜炎經(jīng)顱多普勒檢查的臨床分析[A];第七屆全國(guó)顱腦及頸動(dòng)脈超聲學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2007年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 馮衛(wèi)東;英發(fā)現(xiàn)細(xì)菌性腦膜炎發(fā)病機(jī)制[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

2 麥迪信;類固醇與抗生素可聯(lián)合治療細(xì)菌性腦膜炎[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

3 ;細(xì)菌性腦膜炎及腦膿腫[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2008年

4 ;無(wú)色透明的腦脊液[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2004年

5 上海市醫(yī)療救護(hù)中心主任醫(yī)師 費(fèi)國(guó)忠;面部癤子切莫擠壓[N];家庭醫(yī)生報(bào);2005年

6 黃家欣;新生兒耳朵保護(hù)小知識(shí)[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2009年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 劉永娟;DcR3和sTREM-1在醫(yī)院獲得性細(xì)菌性腦膜炎中的診斷價(jià)值及80例臨床病例分析[D];山東大學(xué);2015年

2 李玲;腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子及其受體在實(shí)驗(yàn)性細(xì)菌性腦膜炎的表達(dá)和神經(jīng)保護(hù)作用的研究[D];浙江大學(xué);2003年

3 劉心潔;基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制劑在幼鼠細(xì)菌性腦膜炎中的試驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2004年

4 馮梅;SHP2在幼鼠細(xì)菌性腦膜炎中的表達(dá)及原釩酸鈉對(duì)腦膜炎腦損害的影響[D];山東大學(xué);2007年

5 鄧敏峰;腦脊液腫瘤壞死因子-α對(duì)鑒別細(xì)菌性腦膜炎及病毒性腦膜炎診斷價(jià)值：系統(tǒng)綜述和Meta分析[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

6 吳興華;廣西貴港市急性腦炎腦膜炎癥候群監(jiān)測(cè)應(yīng)用實(shí)踐與世界衛(wèi)生組織乙腦監(jiān)測(cè)手冊(cè)的現(xiàn)場(chǎng)評(píng)估[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2010年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 徐衛(wèi)華;某兒童醫(yī)院兒童細(xì)菌性腦膜炎預(yù)后不良危險(xiǎn)因素分析[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2014年

2 段欠欠;公共引物介導(dǎo)的多重PCR技術(shù)在細(xì)菌性腦膜炎診斷中的應(yīng)用研究[D];蘇州大學(xué);2015年

3 尚利宏;細(xì)菌性腦膜炎患兒腦脊液中興奮性氨基酸的變化及意義[D];山西醫(yī)科大學(xué);2003年

4 陳益華;新生兒細(xì)菌性腦膜炎48例臨床分析[D];浙江大學(xué);2011年

5 張莉;細(xì)菌性腦膜炎病原學(xué)及S100B蛋白在其早期診斷中價(jià)值的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

6 鄭廣群;bFGF在實(shí)驗(yàn)性細(xì)菌性腦膜炎表達(dá)動(dòng)態(tài)變化的研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2006年

7 陳晨;醫(yī)院獲得性腦膜炎流行病學(xué)調(diào)查及診斷數(shù)學(xué)模型構(gòu)建的初步研究[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

8 劉穎;3％氯化鈉輔助治療兔大腸桿菌腦膜炎時(shí)對(duì)外周臟器的影響[D];中南大學(xué);2010年

9 崔偉麗;協(xié)同信號(hào)分子B7-H3對(duì)肺炎球菌腦膜炎小鼠趨化因子KC、MIP-2及TLR2蛋白表達(dá)的影響[D];蘇州大學(xué);2013年

10 王延平;協(xié)同信號(hào)分子B7-H3對(duì)肺炎鏈球菌腦膜炎小鼠腦損傷的影響[D];蘇州大學(xué);2014年

  本文關(guān)鍵詞：公共引物介導(dǎo)的多重PCR技術(shù)在細(xì)菌性腦膜炎診斷中的應(yīng)用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：493799