山東地區(qū)恙蟲病東方體優(yōu)勢株感染特征及重癥恙蟲病的影響因素研究

發(fā)布時間：2017-06-27 10:23

本文關(guān)鍵詞：山東地區(qū)恙蟲病東方體優(yōu)勢株感染特征及重癥恙蟲病的影響因素研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景恙蟲病(scrub typhus)是由恙蟲病東方體(Orientia tsutusgamushi, Ot)感染引起的以發(fā)熱、焦痂或潰瘍、淋巴結(jié)腫大及皮疹為主要臨床表現(xiàn)的一種自然疫源性疾病,經(jīng)恙螨叮咬傳播。恙蟲病在我國發(fā)生已久,1986年以前,該病僅在我國長江以南地區(qū)有報道流行,流行季節(jié)主要為夏季。夏季型恙蟲病可由Karp型、Kato型和JG型Ot引起,該三型Ot所引起的恙蟲病的并發(fā)癥常常比較嚴(yán)重。1986年以來,我國北方包括山東省在內(nèi)的許多地區(qū)陸續(xù)出現(xiàn)恙蟲病疫源地的報道,流行季節(jié)主要為秋冬季。目前,流行于北京市、天津市、江蘇省、山西省、安徽省、河南省和山東省秋冬季節(jié)的恙蟲病被稱作秋冬型恙蟲病。研究發(fā)現(xiàn),北方地區(qū)的恙蟲病血清型以Gilliam型為主,基因型以Kawasaki型的報道居多。恙蟲病的嚴(yán)重程度由自限性疾病至死亡性疾病不等,主要與患者所感染的Ot類型、診斷及用藥及時與否有關(guān)。恙蟲病常見的嚴(yán)重并發(fā)癥有腦炎、肺炎、心肌炎、急性腎功能衰竭、彌散性血管內(nèi)凝血等,也少數(shù)患者會出現(xiàn)急性聽力功能喪失、急性呼吸窘迫綜合征等,嚴(yán)重者會導(dǎo)致死亡。闡明重癥恙蟲病的危險因素對有效預(yù)防和控制恙蟲病嚴(yán)重并發(fā)癥和死亡病例的發(fā)生有重要意義。研究目的1.根據(jù)近年來山東地區(qū)的Ot優(yōu)勢株,確定其型特異性抗原(type-specific antigen,TSA)編碼基因序列,明確其與國際參考株間核苷酸序列及其編碼的氨基酸序列的差異及同源性關(guān)系。2.闡明山東地區(qū)由Ot優(yōu)勢株所引起的恙蟲病主要臨床特點,為秋冬型恙蟲病的診斷治療提供線索。3.探索重癥恙蟲病的影響因素,為有效預(yù)防和控制恙蟲病嚴(yán)重并發(fā)癥和死亡病例的發(fā)生提供科學(xué)依據(jù)。研究方法根據(jù)山東省疾病報告信息系統(tǒng)(Shandong Diseases Reporting Information System, SDRIS)的恙蟲病監(jiān)測資料,于2010年至2013年間,利用問卷調(diào)查的方式在淄博沂源縣、臨沂蒙陰縣等調(diào)查點的監(jiān)測醫(yī)院收集恙蟲病患者病例信息,并采取恙蟲病病例急性期抗凝血和/或焦痂標(biāo)本,提取DNA后,利用巢式PCR方法針對恙蟲病東方體Ot 56kDa TSA的基因編碼序列進行擴增和測序,并將所得序列與GenBank中的參考序列通過Mega5.0軟件進行序列比對,利用neighbor-joining (NJ)法構(gòu)建系統(tǒng)進化樹。通過Lasergene7.1軟件對Ot 56kDa TSA的堿基序列及其推導(dǎo)的氨基酸序列進行同源性分析,確定近年來山東地區(qū)的Ot優(yōu)勢株是否出現(xiàn)變異,并對Ot優(yōu)勢株所引起的恙蟲病的主要臨床特征加以分析比較。自所收集的恙蟲病病例中,根據(jù)重癥恙蟲病的納入標(biāo)準(zhǔn)確定重癥恙蟲病病例,并與非重癥病例進行病例對照研究。利用SPSS17.0軟件采用單因素、多因素條件Logistic回歸分析方法,對重癥恙蟲病的危險因素進行分析,以O(shè)R值、95%可信區(qū)間(confidence interval,CI)值表示疾病與暴露之間的關(guān)聯(lián)強度。顯著性檢驗水平采用α=0.05。結(jié)果1.病人中Ot基因型分布情況本研究自43例恙蟲病病例中采集到的急性期抗凝血或焦痂標(biāo)本經(jīng)巢式PCR擴增并測序后,將獲得的Ot序列與國際參考序列進行系統(tǒng)發(fā)育分析。分析結(jié)果顯示,本研究中的43條序列全位于類Kawasaki枝,各序列與Kawasaki株的同源性自95.1%至96.4%不等,相互之間的同源性自98.5%至100%不等。其中的四條序列：SH1002、SH1307、SH1306和SH1309位于單獨的四支小分枝上,與其余39株的同源性相對較低,代表了四條新的基因序列。2.類Kawasaki型Ot 56kDa TSA分子結(jié)構(gòu)分析本研究擴增了開放讀碼框架(open reading frame, ORF)基因序列全長的80.11%,共1273 bp的片段長度。擴增區(qū)域共編碼了417個氨基酸,其中4個可變區(qū)(VDⅠ-VDⅣ)所編碼的氨基酸數(shù)量分別為25、22、28和39個,其中VDⅠ、VDⅡ、VDⅣ三個可變區(qū)的氨基酸序列與Kawasaki相應(yīng)三個可變區(qū)的氨基酸序列的一致性分別為96%、81.82%、94.87%,高于與另外三株國際標(biāo)準(zhǔn)株(Karp、Kato、Gilliam)相應(yīng)區(qū)域的一致性；VDⅢ的氨基酸序列與Kawasaki相應(yīng)區(qū)域的一致性為67.86%,低于與Gilliam的VDⅢ氨基酸序列的一致性(78.57%)�；诟骺勺儏^(qū)的堿基序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹分析結(jié)果與氨基酸分析結(jié)果一致。3.恙蟲病患者臨床特征類Kawasaki型Ot所引起的恙蟲病病例以發(fā)熱、焦痂或潰瘍、頭痛、皮疹、寒戰(zhàn)、疲乏等為主要的臨床表現(xiàn)。本研究的43例恙蟲病病例中,42例出現(xiàn)焦痂體征。其中腹股溝、會陰、腋窩和腰部是焦痂的好發(fā)部位。病人主要的實驗室指標(biāo)中,白細(xì)胞增多和減少病例分別占總病例數(shù)的18.6%和4.7%；中性粒細(xì)胞減少和血小板減少癥患者分別占總病例數(shù)的35.9%和23.1%；平均血沉速率為18.43±11.62mm/h。4.重癥恙蟲病危險因素單因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示如下8個因素有統(tǒng)計學(xué)意義：①抗生素使用前疾病持續(xù)天數(shù)；②淋巴結(jié)腫大；③皮疹；④血小板計數(shù)100×109；⑤中性粒細(xì)胞比率50%；⑥淋巴細(xì)胞比率40%；⑦總膽紅素0.024；⑧直接膽紅素0.009mmol/L。多因素Logistic逐步回歸分析中,結(jié)果表明,如下四個因素為重癥恙蟲病的影響因素：①抗生素使用前疾病持續(xù)天數(shù)4.5天(OR=2.287,95%CI=(1.096-4.770),P=0.027)；②淋巴結(jié)腫大(OR=2.438,95%CI=(1.090-5.458),P=0.014)；③皮疹(OR=3.694,95%CI=(1.300-10.495),P=0.014)；④血小板計數(shù)100×109/L(OR=2.287,95%CI=(1.002-4.946),P=0.050)。結(jié)論1.本研究中的43條序列均位于類Kawasaki枝,與Kawasaki原型株的相似度白95.1%至96.4%不等,提示山東地區(qū)人群中存在的Ot感染仍以類Kawasaki型為主。系統(tǒng)發(fā)育分析發(fā)現(xiàn)4條序列(SH1002,SH1306,SH1309,SH1307)位于系統(tǒng)進化樹中獨立的小分支上,代表了4條新的基因序列,提示Ot 56kDa TSA序列可能出現(xiàn)了變異。2.類Kawasaki型Ot與Kawasaki型Ot之間的變異主要發(fā)生在VDⅢ區(qū),該區(qū)的氨基酸序列與Kawasaki相應(yīng)區(qū)域的一致性為67.86%。3.類Kawasaki型Ot所引起的焦痂發(fā)生率高,可為臨床診斷提供重要線索。4.多因素Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)有效抗生素使用前疾病持續(xù)時間長、皮疹的發(fā)生、淋巴結(jié)腫大的發(fā)生和血小板計數(shù)100×109/L是重癥恙蟲病的危險因素。診斷技術(shù)的改進和恙蟲病及時確診并及時使用特效藥可有效預(yù)防重癥恙蟲病的發(fā)生。
【關(guān)鍵詞】：恙蟲病 恙蟲病東方體 56kDa型特異性抗原 危險因素
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R513.2
【目錄】：