本文關(guān)鍵詞：新型雜多酸化合物和冬蟲夏草的體外抗HIV-1病毒活性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrom,AIDS)至今仍在全球范圍內(nèi)迅速蔓延,依然嚴重威脅人類健康和生命安全,因此開發(fā)新型抗艾滋病病毒藥物尋找抗病毒作用新靶點是目前治療艾滋病病毒感染的研究重點和方向。本課題旨在通過細胞水平藥效學評價與多種生物學實驗技術(shù)對課題組前期獲得的雜多酸化合物KA-1和中國傳統(tǒng)中藥材冬蟲夏草以及主要活性成分蟲草素(cordycepin)進行體外抗病毒活性和作用機制的分析探討。對雜多酸化合物KA-1的研究中,首先采用CCK-8法和體外病毒感染模型評價KA-1的體外抗病毒活性,發(fā)現(xiàn)其具有劑量依賴性的抗病毒作用,且KA-1對HIV-1假病毒的IC50為0.073±0.045μg/m L,KA-1在試驗濃度下對HIV-1 R3A野生毒株的抑制率均達到80%以上。與齊多夫定(AZT)進行聯(lián)合用藥,得到其與AZT協(xié)同/拮抗容量為71.46/-39.69 nM2%,表明KA-1與AZT具有協(xié)同作用。應(yīng)用表面等離子共振(Surface Plasmon Resonance,SPR)技術(shù)檢測KA-1與HIV-1 Vpu蛋白、Vif蛋白、逆轉(zhuǎn)錄酶、整合酶和gp41蛋白的結(jié)合情況,初步篩選抗病毒作用靶點,發(fā)現(xiàn)KA-1與Vif蛋白、整合酶和gp41蛋白具有良好的親和力;體外逆轉(zhuǎn)錄酶、整合酶、蛋白酶活性檢測實驗測定KA-1體外對這三種酶活性的影響,其中對整合酶的抑制作用較顯著;通過熒光檢測、Western blot實驗發(fā)現(xiàn)KA-1可以降低外源性Vpu蛋白的表達,并對Vpu蛋白降解BST-2(THN)蛋白作用有一定的抑制,但對Vif蛋白的表達無明顯影響;利用病毒-細胞融合實驗證實KA-1特異性靶向包膜蛋白,并能抑制gp41蛋白核心結(jié)構(gòu)的形成。對蟲草提取物的研究中,采用CCK-8法和假病毒單輪感染實驗檢測蟲草5種不同部位水提物(新鮮蟲體、新鮮子座、新鮮全草、干燥蟲體和干燥子座)的體外抗病毒活性發(fā)現(xiàn)其均具有劑量依賴性的抗病毒作用。應(yīng)用SPR、體外逆轉(zhuǎn)錄酶活性檢測等實驗手段檢測蟲草5種水提物與HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶、Vif蛋白的相互作用以及對逆轉(zhuǎn)錄酶活性的影響,發(fā)現(xiàn)與Vif蛋白、逆轉(zhuǎn)錄酶均有良好的親和力;均具有體外抗逆轉(zhuǎn)錄酶活性,且相比干燥蟲草,新鮮蟲草樣本的抗逆轉(zhuǎn)錄酶活性較顯著。對蟲草的有效活性成分蟲草素的進一步研究發(fā)現(xiàn),蟲草素體外對HIV-1 R3A野生毒株和HIV-1 B亞型Env包膜的假毒株均具有良好的抗HIV-1病毒活性。應(yīng)用SPR,Western blot,酶活性檢測等實驗發(fā)現(xiàn)蟲草素可抑制Vif蛋白降解A3G蛋白的作用,但對Vif蛋白的表達無明顯影響,此外蟲草素對逆轉(zhuǎn)錄酶、整合酶的活性均具有抑制作用,但對蛋白酶活性無明顯影響。綜上所述,研究發(fā)現(xiàn)雜多酸化合物KA-1在體外具有良好的抗HIV-1病毒活性,且與臨床核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑聯(lián)合用藥具有協(xié)同作用,其作用機制可能與抑制整合酶活性、阻止gp41蛋白核心結(jié)構(gòu)的形成有關(guān)。冬蟲夏草在體外具有良好的抗HIV-1病毒活性,且相比干燥蟲草,新鮮蟲草的抑制作用較顯著。表明蟲草的有效抗病毒成分主要存在于新鮮蟲草部分,且容易在干制過程中損失。其藥效成分蟲草素在體外對HIV-1R3A野生毒株和HIV-1 B亞型Env包膜的假毒株具有良好的抗病毒活性,機制與抑制逆轉(zhuǎn)錄酶和整合酶活性有關(guān),且蟲草素對Vif蛋白降解A3G蛋白作用也有一定的抑制作用。本研究闡明了KA-1和蟲草的體外抗病毒活性和初步作用機制,將為新型抗艾滋病病毒藥物的研發(fā)提供了良好的實驗基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：艾滋病 人類免疫缺陷病毒Ⅰ型 雜多酸化合物 冬蟲夏草 蟲草素
【學位授予單位】：北京工業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R512.91
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 主要英文縮寫詞8-11
• 第1章 緒論11-19
• 1.1 研究背景及意義11-17
• 1.1.1 HIV-1 病毒概述11-12
• 1.1.2 抗艾滋病治療研究現(xiàn)狀12-17
• 1.2 研究目的及內(nèi)容17-19
• 1.2.1 研究目的17-18
• 1.2.2 研究內(nèi)容18-19
• 第2章 雜多酸化合物KA-1 體外抗HIV-1 病毒活性研究19-41
• 2.1 實驗材料19-21
• 2.1.1 主要實驗儀器19-20
• 2.1.2 主要試劑、耗材以及相關(guān)溶液20
• 2.1.3 菌株、病毒株、細胞株與質(zhì)粒20-21
• 2.1.4 蛋白與化合物21
• 2.2 實驗方法21-28
• 2.2.1 化合物KA-1 的細胞藥效學評價21-23
• 2.2.2 雜多酸化合物KA-1 抗HIV-1 病毒感染靶細胞的作用機制研究23-28
• 2.2.3 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析方法28
• 2.3 實驗結(jié)果28-38
• 2.3.1 化合物細胞水平藥效學評價28-30
• 2.3.2 化合物抗病毒作用機制研究30-38
• 2.4 討論38-39
• 2.5 本章小結(jié)39-41
• 第3章 冬蟲夏草體外抗HIV-1 病毒活性研究41-53
• 3.1 實驗材料41-42
• 3.1.1 實驗儀器41
• 3.1.2 主要試劑、耗材和相關(guān)溶液41
• 3.1.3 細胞株與質(zhì)粒41
• 3.1.4 病毒、蛋白和實驗材料41-42
• 3.2 實驗方法42-43
• 3.2.1 野生冬蟲夏草浸提物的抗病毒作用機制研究42
• 3.2.2 蟲草素的抗病毒作用機制研究42-43
• 3.3 實驗結(jié)果43-51
• 3.3.1 野生冬蟲夏草浸提物的抗病毒作用機制研究43-46
• 3.3.2 蟲草素的抗病毒作用及機制研究46-51
• 3.4 討論51-52
• 3.5 本章小結(jié)52-53
• 結(jié)論53-55
• 參考文獻55-59
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術(shù)論文59-61
• 致謝61

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 毛寧;張麗艷;張鳳梅;陳秀娟;;離子交換樹脂分離純化蟲草素的工藝條件研究[J];藥物生物技術(shù);2010年05期

2 史玉俊;;8—溴—蟲草素具有抑制腫瘤活性[J];國外醫(yī)藥(植物藥分冊);1989年01期

3 楊杰;陳順志;;蟲草素研究進展[J];中國生化藥物雜志;2008年06期

4 李泳;余潮彬;張兆霞;張軍;莊旭忠;邢U

本文編號：446819