本文關(guān)鍵詞：MTB PhoPR雙組分系統(tǒng)過表達對MTB致病性的影響及機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探討研究結(jié)核分枝桿菌Pho PR雙組分系統(tǒng)過表達對結(jié)核分枝桿菌致病性的影響及其機制。方法:構(gòu)建及鑒定重組穿梭質(zhì)粒p MV361-Pho P和p MV361-Pho R,利用電轉(zhuǎn)化技術(shù)將重組穿梭質(zhì)粒分別導(dǎo)入至H37Rv和H37Ra的感受態(tài)細胞中構(gòu)建過表達菌株,并利用實時熒光定量PCR技術(shù)進行檢測和鑒定,將各過表達各菌株及對照菌株分別感染巨噬細胞,通過CFU菌落計數(shù)方法檢測各菌株在被感染巨噬細胞內(nèi)的增殖能力,通過流式細胞技術(shù)檢測被感染巨噬細胞的凋亡率。結(jié)果:1.構(gòu)建及鑒定了重組穿梭質(zhì)粒p MV361-Pho P、p MV361-Pho R;2.構(gòu)建及鑒定了Pho PR雙組分系統(tǒng)中Pho P/Pho R基因過表達的H37Rv::Pho P菌株,H37Rv::Pho R菌株,H37Ra::Pho P菌株,H37Ra::Pho R菌株;3.CFU菌落計數(shù)檢測結(jié)果顯示:與對照組H37Ra菌株組菌落計數(shù)相比較,H37Ra::Pho P菌株組在感染的第0.5天無顯著變化,在感染的第1天、第3天菌落數(shù)顯著增高,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);H37Ra::Pho R菌株組在感染的第0.5天、第1天、第3天均無顯著變化。與對照組H37Rv菌株組菌落計數(shù)相比較,H37Rv::Pho P菌株組在感染的第0.5天無顯著變化,在感染的第1天、第3天菌落數(shù)顯著增高,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);H37Rv::Pho R菌株組在感染的第0.5天、第1天、第3天均無顯著變化;4.流式細胞技術(shù)檢測結(jié)果顯示:與對照組H37Ra菌株組相比較,H37Ra::Pho P菌株組在感染的1h、12h、24h均無顯著變化;在感染的6h有顯著增高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);H37Ra::Pho R菌株組在感染的1h、6h、12h、24h均無顯著變化。與對照組H37Rv菌株組相比較,H37Rv::Pho P菌株組在感染的1h、6h、12h、24h均無顯著變化;H37Rv::Pho R菌株組在感染的1h、6h、12h、24h均無顯著變化。結(jié)論:1.成功構(gòu)建了重組穿梭質(zhì)粒p MV361-Pho P和p MV361-Pho R;2.成功構(gòu)建了Pho PR雙組分系統(tǒng)中Pho P/Pho R基因過表達的H37Rv::Pho P菌株,H37Rv::Pho R菌株,H37Ra::Pho P菌株,H37Ra::Pho R菌株;3.MTB Pho PR雙組分系統(tǒng)中Pho P基因過表達可能使MTB的致病性增強,Pho R基因過表達對MTB的致病性無明顯影響。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)核桿菌 過表達 Pho PR雙組分系統(tǒng) 增殖 凋亡
【學位授予單位】：石河子大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R52
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-9
• 英漢縮略語名詞對照表9-10
• 前言10-12
• 材料和方法12-26
• 1 材料12-17
• 1.1 菌株12
• 1.2 主要試劑12-14
• 1.3 主要實驗儀器設(shè)備14-15
• 1.4 主要溶液和培養(yǎng)基15-17
• 1.4.1 主要溶液15-16
• 1.4.2 主要培養(yǎng)基16-17
• 2 實驗方法17-26
• 2.1 結(jié)核分枝桿菌的培養(yǎng)17
• 2.2 pMV361載體重組質(zhì)粒的構(gòu)建17-20
• 2.3 結(jié)核分枝桿菌PhoP/PhoR基因過表達菌株的構(gòu)建20-23
• 2.4 RAW264.7 細胞的培養(yǎng)23-24
• 2.5 結(jié)核桿菌感染巨噬細胞模型的建立24
• 2.6 細菌在巨噬細胞內(nèi)增殖能力的檢測（CFU計數(shù)）24
• 2.7 Annexin V-FITC/PI技術(shù)檢測各組感染細胞的凋亡率24-25
• 2.8 統(tǒng)計學分析25-26
• 結(jié)果26-35
• 1 菌株的培養(yǎng)26
• 2 MTB Pho P基因、Pho R基因pMV361載體重組質(zhì)粒的構(gòu)建26-27
• 2.1 目的基因的PCR擴增26
• 2.2 重組穿梭質(zhì)粒的鑒定26-27
• 3 MTB Pho P/PhoR基因過表達結(jié)核分枝桿菌各毒力菌株的構(gòu)建27-29
• 3.1 質(zhì)粒p MV361-PhoP和pMV361-Pho R的提取27
• 3.2 PhoP/Pho R基因過表達菌株抗性篩選27-28
• 3.3 PhoP/Pho R基因過表達菌株質(zhì)粒的提取與鑒定28
• 3.4 PhoP/Pho R基因的PCR擴增及雙酶切鑒定28-29
• 4 實時熒光定量PCR檢測29-31
• 4.1 結(jié)核分枝桿菌總RNA的提取及鑒定29
• 4.2 各Pho P基因過表達毒力菌株的PhoP基因相對表達量29
• 4.3 各Pho R基因過表達毒力菌株的PhoR基因相對表達量29-30
• 4.4 比較H37Rv、BCG、H37Ra的PhoP/PhoR基因的相對表達量30-31
• 5 CFU菌落計數(shù)結(jié)果31-32
• 6 各菌株感染巨噬細胞凋亡率檢測結(jié)果32-35
• 6.1 巨噬細胞凋亡結(jié)果32-33
• 6.2 巨噬細胞凋亡結(jié)果33-35
• 討論35-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻40-43
• 文獻綜述43-49
• 參考文獻47-49
• 致謝49-50
• 作者簡介50-51
• 導(dǎo)師評閱表51

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 張萬江;鮑朗;鄧喜玲;吳芳;曹旭東;王曉櫻;;多耐藥臨床分離株結(jié)核桿菌rpsL基因重組大腸桿菌-結(jié)核桿菌穿梭質(zhì)粒pMV261/rpsL的構(gòu)建及其功能鑒定[J];中國病理生理雜志;2006年03期

2 王釗;雷英;吳芳;章樂;曹旭東;吳江東;張輝;張春軍;朱彬;鄔博;何麗;張玉清;李瑞山;莊睿;梁晨;樊超;李文娟;張萬江;;PhoP/PhoR基因過表達結(jié)核分枝桿菌國際標準強毒株H37Rv的構(gòu)建及鑒定[J];中國病原生物學雜志;2014年07期

  本文關(guān)鍵詞：MTB PhoPR雙組分系統(tǒng)過表達對MTB致病性的影響及機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：414249