目的鑒定日本血吸蟲蟲卵分泌排泄物(ESA)中有血吸蟲病診斷價值蛋白分子,為建立新的高敏感性和特異性的日本血吸蟲病診斷方法奠定基礎(chǔ)。方法日本血吸蟲尾蚴感染家兔后42d,解剖家兔,取肝臟,勻漿后收集蟲卵,置于PBS中,4℃過夜,收集上清,制備蟲卵排泄分泌物。以蟲卵排泄分泌物包被酶標板,采用ELISA檢測不同感染度、不同感染時間小鼠血清抗體滴度。同時以蟲卵ESA ELISA分別檢測血吸蟲病患者血清、健康人血清和弓形蟲病患者血清,觀察蟲卵ESA用于血吸蟲病診斷的敏感性和特異性及交叉反應性。通過一維電泳免疫印跡、二維電泳免疫印跡和飛行質(zhì)譜分析,鑒定蟲卵ESA中具有診斷潛能的蛋白分子。結(jié)果 ELISA檢測結(jié)果顯示血吸蟲感染小鼠血清中抗蟲卵ESA抗體IgG水平隨著感染時間的延長而升高,且與血吸蟲感染度呈正相關(guān),在感染早期即檢出相應抗體。蟲卵ESA檢測血吸蟲病患者血清的敏感性為97.2%,檢測健康人血清的特異性為95.2%,與弓形蟲病患者血清的交叉反應性為25.0%。一維電泳免疫印跡試驗顯示血吸蟲感染兔血清可識別170×10³、150×10³、130×10<...

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圖1小鼠日本血吸蟲感染度與血清抗ESA抗體水平的關(guān)系

ELISA檢測顯示，隨著感染尾蚴條數(shù)的增加，小鼠血清中抗蟲卵ESA抗體滴度逐漸增加。感染尾蚴為5條和10條時，80.0%的小鼠血清抗ESA抗體滴度超過陽性閾值（陽性閾值為陰性值的2.1倍），感染15條及以上100.0%的小鼠血清抗體滴度超過陽性閾值。感染尾蚴為15、20、25、3....

圖2日本血吸蟲感染時間與小鼠血清抗ESA抗體水平的關(guān)系

隨著感染時間的延長，血清中抗ESA的抗體滴度逐漸升高，在感染尾蚴20條后2周時，16.7%的小鼠血清抗ESA抗體滴度達到陽性閾值，3、4周時50.0%的小鼠血清中抗ESA的抗體滴度超過陽性閾值，5周時100.0%的小鼠血清抗ESA抗體滴度超過陽性閾值。4、5、6、7、8、10、1....

圖3日本血吸蟲蟲卵ESA、SEAELISA檢測血吸蟲抗體的敏感性，特異性及交叉反應性比較

以蟲卵ESA包被酶標板，采用ELISA檢測血吸蟲感染者血清、健康人血清和弓形蟲病患者血清，同時以蟲卵SEA為對照。結(jié)果顯示蟲卵ESAELISA檢測血吸蟲病人血清的陽性率為97.2%(35/36），健康人血清的陽性率為4.8%(1/21），弓形蟲病患者血清的陽性率為25.0%(3....

圖4日本血吸蟲蟲卵排泄分泌物免疫印漬分析

蟲卵ESA電泳后轉(zhuǎn)膜，分別用健康兔及血吸蟲感染兔血清進行免疫印漬試驗。結(jié)果顯示，感染兔血清可識別蟲卵ESA中的170×103、150×103、130×103、100×103、72×103、70×103、30×103左右的蛋白，而這些蛋白不被健康兔血清識別（圖4B）。4二維電泳免....

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