目的分析結(jié)核菌(Mtb)感染的程序性死亡配體1(Pdl1)特異性敲除的巨噬細胞(MΦ)轉(zhuǎn)錄譜變化,篩選MΦ內(nèi)PD-L1作用相關(guān)的候選基因。方法構(gòu)建敲除小鼠(Pdl1^Flox/-),通過Cre-loxp技術(shù)培育出MΦ上Pdl1特異性敲除的純合和雜合小鼠(Pdl1^Flox/Flox-Cre,Pdl1^Flox/--Cre),用PCR和流式細胞術(shù)驗證。分離上述小鼠腹腔MΦ,利用轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)檢測Mtb感染MΦ24 h的表達譜,以同窩陰性小鼠(Pdl1^Flox/Flox)為對照,進行生物信息學(xué)分析。結(jié)果 PCR和流式細胞術(shù)證實小鼠敲除成功。純合、雜合及同窩陰性小鼠感染前后相比,差異表達基因最顯著富集項為參與免疫反應(yīng)和免疫過程的GO(P <0. 01; P <0. 01),篩出17個PD-L1相關(guān)的候選基因。通過KEGG富集分析,最顯著富集的通路有Toll樣受體、NF-κB信號通路等(P <0. 01; P <0. 01),篩出6個候選基因。結(jié)論通過轉(zhuǎn)錄譜分析,確定與免疫反應(yīng)及免疫過程有...

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圖1巨噬細胞特異性Pdl1敲除小鼠基因鑒定

與Pdl1Flox/Flox-Cre的未感染組相比，Pdl1Flox/FloxCre感染組差異表達的基因共有744個(Q<0.005)，其中上調(diào)表達基因415個，下調(diào)表達基因329個(圖3A);與Pdl1Flox/--Cre的未感染組比較，Pdl1Flox/--Cre感染組差異表....

圖2流式細胞術(shù)檢測巨噬細胞、T、B細胞上PD-L1的表達

圖1巨噬細胞特異性Pdl1敲除小鼠基因鑒定2.6差異表達基因的GO富集分析結(jié)果

圖3差異基因火山圖

與未感染組相比，Pdl1Flox/Flox-Cre感染組，Pdl1Flox/--Cre感染組，Pdl1Flox/Flox感染組最顯著富集組份均為參與免疫反應(yīng)的GO:0006955(P<0.01)與參與免疫系統(tǒng)過程的GO:0002376(P<0.01)，涉及差異表達的基因分別為18....

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