目的:瘧疾是經(jīng)媒介按蚊傳播引起的嚴(yán)重威脅人類健康的寄生原蟲感染性疾病。全球每年約有2億700萬瘧疾病例,60萬人死于瘧疾感染。瘧原蟲在人體內(nèi)可以分為肝期無性增殖和紅內(nèi)期裂體增殖,其中紅內(nèi)期是瘧原蟲致病并引起感染宿主產(chǎn)生嚴(yán)重臨床癥狀的主要階段。瘧原蟲感染紅細胞的結(jié)構(gòu)和功能改變可幫助瘧原蟲逃避宿主免疫系統(tǒng)的清除,并對宿主產(chǎn)生嚴(yán)重致病性和致死性。紅細胞結(jié)構(gòu)和功能等一系列變化的產(chǎn)生,源于紅內(nèi)期原蟲向宿主紅細胞胞漿和感染紅細胞膜表面分泌大量原蟲蛋白,而原蟲蛋白的分泌又有賴于紅內(nèi)期原蟲自身建立的獨特網(wǎng)狀蛋白轉(zhuǎn)運系統(tǒng)。SURFIN是近年研究發(fā)現(xiàn)的瘧原蟲蛋白家族,屬于目前尚未闡明轉(zhuǎn)運機制的PNEPs(PEXEL negative exported proteins,PNEPs)蛋白家族。SURFIN蛋白在惡性瘧原蟲感染紅細胞黏附宿主內(nèi)皮細胞和裂殖子侵襲過程中發(fā)揮重要作用。因此,本研究擬選取惡性瘧原蟲SURFIN_1.1蛋白,通過分子生物學(xué)和免疫學(xué)相關(guān)技術(shù),闡明介導(dǎo)SURFIN_1.1蛋白轉(zhuǎn)運的相關(guān)序列,從而為抗瘧新藥靶位的研發(fā)提供理論依據(jù)。研究方法:通過生物信息...

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
1 前言
2 材料與方法
    2.1 主要試劑和儀器
        2.1.1 主要試劑
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 載體與蟲株
    2.2 主要研究方法
        2.2.1 生物信息學(xué)分析
        2.2.2 惡性瘧瘧原蟲基因組DNA(gDNA)的提取
        2.2.3 pSLI-SURFIN1.1
full-2×FKBP-GFP載體構(gòu)建
        2.2.4 游離型表達載體構(gòu)建
        2.2.5 惡性瘧原蟲培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染
        2.2.6 SURFIN_1.1 重組蛋白的定位和表達檢測
3 結(jié)果
    3.1 生物信息學(xué)分析
    3.2 融合GFP標(biāo)簽SURFIN_1.1全長蛋白轉(zhuǎn)運至茂式點
        3.2.1 pSLI-SURFIN1.1
full-2×FKBP-GFP載體構(gòu)建,轉(zhuǎn)染和篩選
        3.2.2 SURFIN1.1
full-GFP重組蛋白定位檢測
    3.3 介導(dǎo)SURFIN_1.1轉(zhuǎn)運至茂式點的結(jié)構(gòu)域
        3.3.1 SURFIN_1.1NCVT-Cyt和SURFIN_1.1N-T-Cyt表達載體的構(gòu)建,轉(zhuǎn)染和篩選
        3.3.2 SURFIN_1.1NCVT-Cyt和SURFIN_1.1N-T-Cyt重組蛋白檢測
        3.3.3 重組蛋白在惡性瘧原蟲紅內(nèi)期的定位檢測
    3.4 分析N端、TM和 cyt區(qū)域在蛋白轉(zhuǎn)運中的功能
        3.4.1 SURFIN_1.1N-T,SURFIN_1.1N-Cyt,SURFIN_1.1T-Cyt表達載體構(gòu)建,轉(zhuǎn)染和轉(zhuǎn)染株篩選
        3.4.2 SURFIN_1.1N-T,SURFIN_1.1N-Cyt,SURFIN_1.1T-Cyt重組蛋白檢測
        3.4.3 重組蛋白在惡性瘧原蟲紅內(nèi)期的定位檢測
    3.5 SURFIN_1.1蛋白N端轉(zhuǎn)運介導(dǎo)序列分析
        3.5.1 SURFIN_1.1蛋白N端截短表達載體構(gòu)建,轉(zhuǎn)染和轉(zhuǎn)染株篩選
        3.5.2 N端截短重組蛋白檢測
        3.5.3 重組蛋白在惡性瘧原蟲紅內(nèi)期的定位檢測
4 討論
5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
文獻綜述
    參考文獻
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡介



本文編號：3860950

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