來自鼠疫耶爾森菌的血紅素蛋白質(zhì)Yersinia pestis HmuT(YpHmuT)隸屬于第三類周質(zhì)結(jié)合蛋白,其分子量大小為29.57 kD。YpHmuT是細(xì)菌攝取血紅素的一個重要組成部分,在鼠疫耶爾森菌中YpHmuT可以將其所結(jié)合的血紅素傳遞給血紅素轉(zhuǎn)運蛋白HmuUV,HmuUV進(jìn)而將血紅素轉(zhuǎn)運進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)。之前的研究描述了YpHmuT結(jié)合血紅素前后的晶體結(jié)構(gòu)。晶體結(jié)構(gòu)疊加顯示,結(jié)合血紅素前后的兩種形式的蛋白(apoYpHmuT和hemin-YpHmuT)在血紅素結(jié)合位點周圍的構(gòu)象發(fā)生了微弱的變化。當(dāng)結(jié)合血紅素后,YpHmuT的N端和C端會發(fā)生一定程度的扭轉(zhuǎn)。其中,N端結(jié)構(gòu)域的變化主要為α螺旋的旋轉(zhuǎn)。而C端結(jié)構(gòu)域的α螺旋、β折疊、loop區(qū)均出現(xiàn)了一定程度的扭轉(zhuǎn)。出乎意料地是,YpHmuT通過酪氨酸和組氨酸可結(jié)合兩個血紅素,而與之同源性較高其它周質(zhì)血紅素結(jié)合蛋白(如ShuT和PhuT)均只能結(jié)合一個血紅素。本文在已有的研究基礎(chǔ)上,對YpHnuT進(jìn)行了的以下一系列研究:首先,本文通過對YpHmuT進(jìn)行可溶性分析后發(fā)現(xiàn)其屬于蛋白包涵體,利用尿素作為變性劑將蛋白變性,并通過透析的方法得到可...

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 綜述
    1.1 鼠疫桿菌
    1.2 革蘭式陰性菌體內(nèi)的血紅素轉(zhuǎn)運機(jī)制
        1.2.1 血紅素直接轉(zhuǎn)運系統(tǒng)
        1.2.2 血紅素載體Hemophore介導(dǎo)的血紅素間接轉(zhuǎn)運系統(tǒng)
    1.3 鼠疫血紅素蛋白YpHmuT
        1.3.1 YpHmuT的一級結(jié)構(gòu)
        1.3.2 YpHmuT的高級結(jié)構(gòu)
    1.4 本課題研究的意義
第二章 YpHmuT的表達(dá)、純化
    2.1 引言
    2.2 材料
        2.2.1 主要試劑
        2.2.2 主要儀器
    2.3 實驗方法
        2.3.1 YpHmuT的表達(dá)及可溶性分析
        2.3.2 YpHmuT的變復(fù)性處理
        2.3.3 YpHmuT的純化
        2.3.4 目的蛋白YpHmuT的活性驗證
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 YpHmuT的表達(dá)及可溶性分析
        2.4.2 YpHmuT的變復(fù)性處理
        2.4.3 YpHmuT的純化
        2.4.4 YpHmuT的活性驗證
    2.5 結(jié)論
第三章 YpHmuT與hemin/heme相互作用的性質(zhì)研究
    3.1 引言
    3.2 材料
        3.2.1 主要試劑
        3.2.2 主要儀器
    3.3 實驗方法
        3.3.1 YpHmuT與hemin的相互作用測定
        3.3.2 YpHmuT與heme的相互作用測定
        3.3.3 紫外差光譜法測定YpHmuT與hemin/heme的相互作用
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 YpHmuT與hemin的相互作用
        3.4.2 YpHmuT與heme的相互作用
    3.5 結(jié)論
第四章 TNS探測YpHmuT的構(gòu)象變化
    4.1 引言
    4.2 材料
        4.2.1 主要試劑
        4.2.2 主要儀器
    4.3 實驗方法
        4.3.1 熒光光譜的測定
        4.3.2 紫外光譜的測定
    4.4 結(jié)果與討論
        4.4.1 YpHmuT結(jié)合hemin/heme前后構(gòu)象改變
        4.4.2 YpHmuT與TNS結(jié)合常數(shù)及相互作用的測定
        4.4.3 TNS和YpHmuT之間的能量轉(zhuǎn)移
        4.4.4 不同濃度的血紅素對YpHmuT構(gòu)象的影響
        4.4.5 分子模擬TNS與YpHmuT的相互作用
    4.5 結(jié)論
第五章 總結(jié)與展望
    5.1 總結(jié)
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡況及聯(lián)系方式



本文編號：3858839