目的建立聚合酶螺旋反應(yīng)(polymerase spiral reaction,PSR)檢測結(jié)核分枝桿菌的方法并評價效果。方法針對結(jié)核分枝桿菌插入序列IS6110設(shè)計引物進行PSR檢測。提取結(jié)核分枝桿菌基因組DNA,加入Bst DNA聚合酶的RM2X反應(yīng)液中,在熒光定量PCR儀上于63℃反應(yīng)45 min,通過熒光信號進行檢測。通過對引物序列進行優(yōu)化,篩選出最佳引物序列,并對其檢測特異性和最低檢出限進行評估。于2019年5—8月間從鄭州市第六人民醫(yī)院連續(xù)收集200例肺結(jié)核患者痰液樣本(同一患者收集3份),對痰標本進行痰涂片、固體痰培養(yǎng)和PSR檢測。以痰培養(yǎng)結(jié)果為參照,評價PSR對結(jié)核病患者的檢測效能。結(jié)果通過引物序列優(yōu)化,篩選出一套對結(jié)核分枝桿菌檢測的PSR引物,使用該引物進行PSR的最低檢出限可達到10³菌落形成單位(CFU)/ml;檢測特異性實驗表明該方法與15株非結(jié)核分枝桿菌無交叉反應(yīng)。200例肺結(jié)核患者中,痰涂片檢測陽性48例,陽性檢出率為24.0%(48/200);痰培養(yǎng)檢測陽性83例,陽性檢出率為41.5%(83/200);PSR方法檢測陽性87例,陽性檢...

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
材料和方法
    一、材料與設(shè)備
        1．試劑：
        2．細菌及來源：
        3．主要設(shè)備：
    二、引物設(shè)計及合成
    三、樣品處理方法
    四、PSR檢測方法的建立
    五、最低檢出限評價
    六、痰涂片抗酸染色顯微鏡檢及固體痰培養(yǎng)
    七、統(tǒng)計學(xué)處理
結(jié)果
    一、PSR檢測結(jié)核分枝桿菌方法的建立
    二、最低檢出限分析
    三、PSR檢測結(jié)核病患者效能評價
討論



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