目的:NK細(xì)胞是固有免疫系統(tǒng)中一類大顆粒淋巴細(xì)胞,其主要表達(dá)CD56分子和/或CD16分子,不表達(dá)CD3分子,在抗腫瘤及抗病毒反應(yīng)中均起到了重要的作用,是免疫系統(tǒng)的第一道防線。根據(jù)其表面的不同標(biāo)志物可將NK細(xì)胞劃分為不同的亞群,不同的亞群發(fā)揮著不同的功能,包括細(xì)胞因子分泌、殺傷靶細(xì)胞以及免疫調(diào)節(jié)作用。單細(xì)胞測(cè)序作為一項(xiàng)新興的技術(shù),主要被應(yīng)用于細(xì)胞類型鑒定、細(xì)胞異質(zhì)性、信號(hào)通路差異響應(yīng)及分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)等方面的研究。HIV的感染會(huì)導(dǎo)致NK細(xì)胞亞群分布及功能的改變,但利用單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)研究健康對(duì)照及HIV感染者總NK細(xì)胞亞群變化還尚未見(jiàn)報(bào)道;針對(duì)人類CD56⁺NK細(xì)胞,出現(xiàn)了以CD11b、CD27分子劃分的新的分群方式,而在對(duì)HIV感染的研究中,有關(guān)新的分群方式來(lái)定義CD56⁺NK細(xì)胞亞群及功能的研究仍未見(jiàn)報(bào)道;HIV感染導(dǎo)致NK細(xì)胞中CD56^-CD16⁺亞群數(shù)量的增加,該亞群的殺傷功能及細(xì)胞因子分泌功能減弱,但CD56^-CD16⁺亞群是否發(fā)揮著免疫調(diào)節(jié)功能未知。...

【文章頁(yè)數(shù)】：121 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略語(yǔ)
第一部分 :單細(xì)胞測(cè)序揭示HIV感染者總NK細(xì)胞亞群特征
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象
        2.2 實(shí)驗(yàn)材料
            2.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑與耗材
            2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.3 實(shí)驗(yàn)方法
            2.3.1 外周血中分選NK細(xì)胞
            2.3.2 單細(xì)胞樣本的制備及檢測(cè)
            2.3.3 單細(xì)胞測(cè)序結(jié)果的分析
            2.3.4 GO及KEGG分析
    3 結(jié)果
        3.1 樣本的質(zhì)量控制
        3.2 健康人NK細(xì)胞基因水平的亞群分布特征
        3.3 健康人及HIV感染者NK細(xì)胞相關(guān)性分析
        3.4 HIV感染導(dǎo)致NK細(xì)胞功能改變
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 :HIV感染者CD56+NK細(xì)胞應(yīng)用CD11b CD27定義的各個(gè)亞群功能及其調(diào)節(jié)作用的研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象
        2.2 實(shí)驗(yàn)材料
            2.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
            2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.3 實(shí)驗(yàn)方法
            2.3.1 NK細(xì)胞CD11b CD27亞群分群情況的檢測(cè)
            2.3.2 NK細(xì)胞CD11b CD27亞群表面受體表達(dá)情況檢測(cè)
            2.3.3 NK細(xì)胞CD11b CD27亞群分泌IFN-γ、CD107 脫顆粒的檢測(cè)
            2.3.4 NK細(xì)胞CD11b CD27亞群殺傷功能的檢測(cè)
            2.3.5 NK細(xì)胞CD11b CD27亞群分泌IL-10、TGF-β的檢測(cè)
            2.3.6 NK細(xì)胞CD11b CD27亞群Granzyme B及 Perforin存儲(chǔ)情況的檢測(cè)
            2.3.7 NK細(xì)胞CD11b CD27亞群抑制CD4+T 細(xì)胞增殖的檢測(cè)
            2.3.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 HIV感染者CD11b⁺CD27-亞群百分比降低,CD11b^-CD27^-亞群百分比顯著升高
        3.2 HIV感染者CD11b CD27定義的NK亞群活化性受體增高,但CD11b^-CD27^-NK亞群低表達(dá)活化性受體
        3.3 CD11b^-CD27^-NK亞群呈現(xiàn)幼稚的表型特征
            3.3.1 CD11b^-CD27^-NK亞群低表達(dá)成熟marker——CD11c
            3.3.2 CD11b^-CD27^-NK亞群低表達(dá)衰老marker——CD
            3.3.3 CD11b^-CD27^-NK亞群幼稚marker——CCR7表達(dá)高于CD11b⁺CD27^-NK亞群
        3.4 CD11b CD27定義的NK細(xì)胞亞群checkpoint點(diǎn)的表達(dá)水平在HIV感染者中顯著升高
        3.5 CD11b^-CD27-NK亞群細(xì)胞代謝特征
            3.5.1 CD11b^-CD27^-NK亞群葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體表達(dá)較低
            3.5.2 CD11b^-CD27^-NK亞群脂質(zhì)受體高于CD11b⁺CD27^-NK亞群
            3.5.3 CD11b^-CD27^-NK亞群氨基酸受體高于CD11b⁺CD27^-NK亞群
        3.6 CD11b^-CD27^-NK亞群分泌IFN-γ及CD107a的脫顆粒功能不良
        3.7 CD11b^-CD27^-NK亞群顆粒霉及穿孔素儲(chǔ)存能力良好,釋放能力受損
        3.8 CD11b^-CD27^-NK亞群分泌負(fù)向調(diào)節(jié)因子
        3.9 CD11b^-CD27^-NK亞群能夠抑制CD4⁺T 細(xì)胞增殖
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分 :HIV感染者CD56^-NK細(xì)胞的變化及調(diào)節(jié)作用的研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 研究對(duì)象
        2.2 實(shí)驗(yàn)材料
            2.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
            2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.3 實(shí)驗(yàn)方法
            2.3.1 NK細(xì)胞亞群及分泌IL-10及TGF-β檢測(cè)
            2.3.2 NK細(xì)胞、T細(xì)胞分選及IFN-γ的檢測(cè)
            2.3.3 NK細(xì)胞表面PD-L1表達(dá)情況的檢測(cè)
            2.3.4 CD8⁺T細(xì)胞表面PD-1表達(dá)情況的檢測(cè)
            2.3.5 NK細(xì)胞IL-10及TGF-β封閉實(shí)驗(yàn)
            2.3.6 NK細(xì)胞PD-L1封閉實(shí)驗(yàn)
            2.3.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 HIV感染者CD56^-CD16⁺NK細(xì)胞百分比顯著增高
        3.2 HIV感染者CD56^-CD16⁺NK細(xì)胞分泌高水平IL-10及TGF-β
        3.3 HIV感染者CD56^-CD16⁺NK亞群抑制CD8⁺T細(xì)胞功能
        3.4 阻斷CD56^-CD16⁺NK細(xì)胞分泌的IL-10及TGF-β可部分恢復(fù)CD8⁺T 細(xì)胞功能
        3.5 CD56^-CD16⁺NK細(xì)胞通過(guò)直接接觸抑制CD8⁺T細(xì)胞功能
        3.6 HIV感染未治療患者CD56^-CD16⁺NK細(xì)胞Tigit未升高
        3.7 HIV感染者CD8⁺T 細(xì)胞高表達(dá)PD-1,CD56^-CD16⁺NK細(xì)胞高表達(dá)其配體PD-L1
        3.8 封閉CD56^-CD16⁺NK細(xì)胞高表達(dá)的PD-L1 可部分恢復(fù)CD8⁺T 細(xì)胞分泌IFN-γ功能
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3826070