瘧疾(Malaria)是一種嚴(yán)重危害人類健康的傳染性寄生蟲病,由瘧原蟲經(jīng)按蚊傳播引起。世界衛(wèi)生組織(WHO)最新報(bào)告,2016年仍有2.16億瘧疾病例爆發(fā),其中死亡人數(shù)達(dá)44.5萬,分布在全球的91個(gè)國家。約90%的瘧疾病例和死亡人數(shù)發(fā)生在非洲。惡性瘧原蟲(Plasmodium falciparum)是感染人類的四種瘧原蟲中最為致命的,其主要流行于非洲國家。簡便準(zhǔn)確的快速及時(shí)診斷技術(shù)對瘧疾的防治有重要意義,可指導(dǎo)準(zhǔn)確用藥,避免耐藥和病情惡化,還可監(jiān)控和預(yù)防瘧疾的大規(guī)模暴發(fā)流行。富組氨酸蛋白2(Histidine-rich protein 2,HRP2)和乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)是惡性瘧原蟲檢測中常用的兩種標(biāo)志物。HRP2因其具有較高的靈敏度,從而在惡性瘧原蟲的檢測中具有更廣泛的應(yīng)用,而LDH可以作為HRP2基因缺失的瘧原蟲的檢測標(biāo)志物。因此,試劑若能同時(shí)檢出兩種標(biāo)志物,則可避免單一標(biāo)志物檢測的不足,具有更高的敏感性。本課題采用膠體金免疫層析技術(shù)及雙抗體夾心法,研制成功了一種用于檢測人血液中惡性瘧原蟲特異性HRP2和LDH的快速診斷試劑(RDT)。...

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 瘧疾概述
    1.2 瘧疾流行現(xiàn)狀
        1.2.1 全球流行現(xiàn)狀
        1.2.2 我國流行現(xiàn)狀
    1.3 瘧疾診斷方法介紹
        1.3.1 厚薄血膜涂片顯微鏡檢查法
        1.3.2 PCR檢測法
        1.3.3 快速診斷試劑(RDT)
    1.4 RDT在瘧疾防治工作中的作用
    1.5 惡性瘧原蟲的生物標(biāo)志物
        1.5.1 富組氨酸蛋白2(Histidine-rich protein2,HRP2)
        1.5.2 乳酸脫氫酶(Lactate dehydrogenase,LDH)
        1.5.3 醛縮酶(Aldolase,ALD)
    1.6 本課題的主要研究內(nèi)容和意義
        1.6.1 主要研究內(nèi)容
        1.6.2 研究意義
第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 主要試劑與材料
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 主要溶液的配制
        2.1.4 主要樣本
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)原理
        2.2.2 自制參考品的制備
        2.2.3 膠體金的制備
        2.2.4 Pf-HRP2抗體對的選擇
        2.2.5 Pf-LDH抗體對的選擇
        2.2.6 硝酸纖維素膜的選擇
        2.2.7 抗體標(biāo)記工藝優(yōu)化
        2.2.8 金標(biāo)記物稀釋緩沖液工藝優(yōu)化
        2.2.9 金標(biāo)記物結(jié)合墊工藝優(yōu)化
        2.2.10 抗體包被工藝優(yōu)化
        2.2.11 樣本稀釋液工藝優(yōu)化
        2.2.12 性能評估
        2.2.13 穩(wěn)定性研究
        2.2.14 色標(biāo)卡體系
        2.2.15 臨床驗(yàn)證
第三章 結(jié)果和討論
    3.1 自制參考品特性
        3.1.1 基質(zhì)血特性
        3.1.2 陰性參考品特性
        3.1.3 陽性參考品特性
        3.1.4 精密性參考品特性
    3.2 惡性瘧原蟲快速診斷試劑盒的研制工藝
        3.2.1 膠體金特性
        3.2.2 Pf-HRP2抗體對的選擇標(biāo)準(zhǔn)
        3.2.3 Pf-LDH抗體對的選擇標(biāo)準(zhǔn)
        3.2.4 硝酸纖維素膜的選擇標(biāo)準(zhǔn)
        3.2.5 抗體標(biāo)記工藝優(yōu)化
        3.2.6 金標(biāo)記物稀釋緩沖液工藝優(yōu)化
        3.2.7 金標(biāo)記物結(jié)合墊工藝優(yōu)化
        3.2.8 抗體包被工藝優(yōu)化
        3.2.9 樣本稀釋液工藝優(yōu)化
    3.3 性能評估
        3.3.1 分析靈敏度
        3.3.2 分析特異性
        3.3.3 精密性
        3.3.4 鉤狀效應(yīng)
    3.4 國家參考品測試
    3.5 穩(wěn)定性研究
        3.5.1 加速穩(wěn)定性
        3.5.2 運(yùn)輸穩(wěn)定性
        3.5.3 開封穩(wěn)定性
        3.5.4 實(shí)時(shí)穩(wěn)定性
    3.6 臨床驗(yàn)證
        3.6.1 臨床樣本統(tǒng)計(jì)
        3.6.2 臨床結(jié)果統(tǒng)計(jì)
    3.7 討論
        3.7.1 建立自制參考品
        3.7.2 研制惡性瘧原蟲快速診斷試劑盒
        3.7.3 評價(jià)惡性瘧原蟲快速診斷試劑盒
第四章 結(jié)論與展望
    4.1 結(jié)論
    4.2 展望
參考文獻(xiàn)
附錄1
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間已發(fā)表或錄用的論文



本文編號：3815720