目的:鑒定來源于梅毒螺旋體(Treponema pallidum subsp.Pallidum,Tp)刺激后的巨噬細(xì)胞分泌外泌體中miRNA表達(dá)譜。探討目標(biāo)miR-146a-5p對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性及單個(gè)核細(xì)胞跨內(nèi)皮遷移的作用及其相關(guān)機(jī)制。方法:將Tp接種于雄兔睪丸,建立感染模型,獲取足量、高純度梅毒螺旋體。ExoQuick-TCTM試劑盒提取Tp刺激巨噬細(xì)胞分泌的外泌體,予以透射電鏡、NTA及Western blot鑒定。提取Tp刺激組和對(duì)照細(xì)胞外泌體中的miRNA進(jìn)行芯片鑒定,篩選差異性miRNA。選擇差異性表達(dá)較明顯的miR-146a-5p作為研究對(duì)象,RT-qPCR進(jìn)一步驗(yàn)證miR-146a-5p的表達(dá)情況。提取20個(gè)早期梅毒患者和20名健康對(duì)照血漿外泌體,RT-qPCR驗(yàn)證miR-146a-5p的表達(dá)情況。外泌體與HUVEC共培養(yǎng)后通過激光共聚焦顯微鏡和RT-qPCR的方法驗(yàn)證miR-146a-5p在細(xì)胞間傳遞。應(yīng)用Transwell構(gòu)建HUVEC單層模型,檢測外泌體中miR-146a-5p對(duì)HUVEC單層的通透性及單個(gè)核細(xì)胞跨內(nèi)皮遷移的影響。應(yīng)用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測法對(duì)m...

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
主要中英文縮寫
中文摘要
ABSTRACT
前言
    參考文獻(xiàn)
第一部分 梅毒螺旋體誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞分泌外泌體中差異性miRNA篩選與驗(yàn)證
    引言
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 外泌體中miR-146a-5p降低血管內(nèi)皮細(xì)胞的單個(gè)核細(xì)胞跨內(nèi)皮遷移和通透性
    引言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
第三部分 外泌體中miR-146a-5p靶向調(diào)控JAM-C基因作用
    引言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
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本文編號(hào)：3804792