結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium Tuberculosis,Mtb)是典型的胞內(nèi)寄生菌,肺泡巨噬細(xì)胞作為免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞和效應(yīng)細(xì)胞,在感染過(guò)程中通過(guò)吞噬、抗原遞呈和分泌多種細(xì)胞因子等功能來(lái)調(diào)控機(jī)體炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn),肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞(Alveolar epithelial type II cells, AECⅡ)與巨噬細(xì)胞一樣也是結(jié)核病原菌最先侵染的靶細(xì)胞；AECⅡ除了在肺臟的正常細(xì)胞更新和損傷修復(fù)過(guò)程中可增殖分化為肺泡Ⅰ型和Ⅱ型上皮細(xì)胞,并合成和分泌肺表面活性物質(zhì),維持肺泡內(nèi)外液體平衡,還在肺臟抵御外源微生物感染中具有重要的免疫調(diào)節(jié)的作用,這一作用使AECⅡ細(xì)胞成為人們研究的熱點(diǎn)之一。在AECⅡ細(xì)胞應(yīng)對(duì)外源微生物(如結(jié)核分枝桿菌)感染中,受到多種信號(hào)網(wǎng)絡(luò)的復(fù)雜調(diào)控,具體的調(diào)控機(jī)制仍在研究和探討中。而作為參與組織特化和細(xì)胞遷移等發(fā)育過(guò)程的關(guān)鍵Wnt信號(hào)通路在肺臟感染結(jié)核分枝桿菌的過(guò)程中,其所在AECⅡ細(xì)胞中是否也對(duì)先天免疫發(fā)揮了重要的調(diào)控作用,目前尚未見(jiàn)到報(bào)道。因此,本研究以Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞A549細(xì)胞為模型,分析其在牛結(jié)核分枝桿菌卡介苗(BCG)和脂多糖(LPS)...

【文章頁(yè)數(shù)】：55 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 Wnt信號(hào)通路
        1.1.1 Wnt蛋白
        1.1.2 經(jīng)典Wnt信號(hào)途徑
        1.1.3 非經(jīng)典Wnt信號(hào)途徑
        1.1.4 Wnt蛋白與Wnt信號(hào)通路
    1.2 Wnt信號(hào)在免疫調(diào)節(jié)中的作用
        1.2.1 Wnt信號(hào)通路在炎癥反應(yīng)中作為一個(gè)古老通路中的新角色
        1.2.2 Wnt3a和Wnt5a作為兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)型Wnts在小鼠骨髓巨噬細(xì)胞Wnt/β-catenin信號(hào)中起著相反的作用
        1.2.3 Wnt信號(hào)在巨噬細(xì)胞中的調(diào)節(jié)作用
    1.3 肺臟上皮細(xì)胞的介紹
    1.4 肺臟上皮細(xì)胞中經(jīng)典Wnt信號(hào)的研究進(jìn)展
    1.5 結(jié)核分枝桿菌的介紹
    1.6
        1.6.1 TLR信號(hào)通路介紹
        1.6.2 TLR信號(hào)通路受體
        1.6.3 TLRs介導(dǎo)的信號(hào)通路
        1.6.4 MyD88
        1.6.5 MyD88依賴(lài)信號(hào)通路與MyD88非依賴(lài)信號(hào)通路
    1.7 在結(jié)核分枝桿菌感染中Wnt/β-catenin信號(hào)通路和炎癥反應(yīng)相互的調(diào)節(jié)作用
    1.8 本課題研究意義
第二章 結(jié)核分枝桿菌刺激對(duì)肺臟上皮細(xì)胞Wnt/β-catenin信號(hào)途徑的影響
    引言
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞系
        2.1.2 使用儀器
        2.1.3 主要試劑與載體
    2.2 實(shí)驗(yàn)步驟與方法
        2.2.1 人肺臟上皮細(xì)胞A549細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2.2 用于X-gal染色對(duì)A549細(xì)胞的轉(zhuǎn)染
        2.2.3 X-gal染色液配制
        2.2.4 X-gal染色步驟
        2.2.5 用于雙熒光素酶檢測(cè)對(duì)A549細(xì)胞的轉(zhuǎn)染
        2.2.6 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)方法
        2.2.7 人肺臟上皮細(xì)胞A549 RNA的提取及濃度測(cè)定
        2.2.8 cDNA的構(gòu)建
        2.2.9 Real Time PCR
        2.2.10 對(duì)目的基因PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)分析
        2.2.11 細(xì)胞全蛋白提取
        2.2.12 根據(jù)試劑盒說(shuō)明提取細(xì)胞胞漿蛋白和細(xì)胞核蛋白
        2.2.13 測(cè)定不同處理A549細(xì)胞蛋白濃度
        2.2.14 蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)
        2.2.15 MTT
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 A549細(xì)胞轉(zhuǎn)染結(jié)果
        2.3.2 β-半乳糖苷酶在A549細(xì)胞中的表達(dá)情況
        2.3.3 BCG和LPS刺激抑制上皮細(xì)胞中的經(jīng)典Wnt信號(hào)活性
        2.3.4 BCG感染對(duì)A549細(xì)胞中Wnt信號(hào)家族相關(guān)因子表達(dá)的影響
        2.3.5 BCG感染對(duì)A549細(xì)胞中Wnt信號(hào)家族相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
    2.4 討論
第三章 Wnt/β-catenin信號(hào)途徑對(duì)肺臟上皮細(xì)胞抗結(jié)核分枝桿菌感染中炎性反應(yīng)的作用及調(diào)控機(jī)制
    引言
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 細(xì)胞系
        3.1.2 使用儀器
        3.1.3 主要試劑
    3.2 實(shí)驗(yàn)步驟和方法
        3.2.1 人肺臟上皮細(xì)胞A549細(xì)胞的培養(yǎng)
        3.2.2 雙熒光素酶檢測(cè)分析
        3.2.3 qPCR
        3.2.4 WesternBlot
        3.2.5 ELISA
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 Wnt/β-catenin負(fù)調(diào)控A549細(xì)胞中BCG和LPS刺激誘導(dǎo)的細(xì)胞炎癥反應(yīng)
        3.3.2 在肺臟上皮細(xì)胞A549中MyD88抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路
    3.4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3779731