結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium Tuberculosis,Mtb)是典型的胞內(nèi)寄生菌,肺泡巨噬細(xì)胞作為免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞和效應(yīng)細(xì)胞,在感染過程中通過吞噬、抗原遞呈和分泌多種細(xì)胞因子等功能來調(diào)控機(jī)體炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答。近年來研究發(fā)現(xiàn),肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞(Alveolar epithelial type II cells, AECⅡ)與巨噬細(xì)胞一樣也是結(jié)核病原菌最先侵染的靶細(xì)胞；AECⅡ除了在肺臟的正常細(xì)胞更新和損傷修復(fù)過程中可增殖分化為肺泡Ⅰ型和Ⅱ型上皮細(xì)胞,并合成和分泌肺表面活性物質(zhì),維持肺泡內(nèi)外液體平衡,還在肺臟抵御外源微生物感染中具有重要的免疫調(diào)節(jié)的作用,這一作用使AECⅡ細(xì)胞成為人們研究的熱點之一。在AECⅡ細(xì)胞應(yīng)對外源微生物(如結(jié)核分枝桿菌)感染中,受到多種信號網(wǎng)絡(luò)的復(fù)雜調(diào)控,具體的調(diào)控機(jī)制仍在研究和探討中。而作為參與組織特化和細(xì)胞遷移等發(fā)育過程的關(guān)鍵Wnt信號通路在肺臟感染結(jié)核分枝桿菌的過程中,其所在AECⅡ細(xì)胞中是否也對先天免疫發(fā)揮了重要的調(diào)控作用,目前尚未見到報道。因此,本研究以Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞A549細(xì)胞為模型,分析其在牛結(jié)核分枝桿菌卡介苗(BCG)和脂多糖(LPS)...

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 Wnt信號通路
        1.1.1 Wnt蛋白
        1.1.2 經(jīng)典Wnt信號途徑
        1.1.3 非經(jīng)典Wnt信號途徑
        1.1.4 Wnt蛋白與Wnt信號通路
    1.2 Wnt信號在免疫調(diào)節(jié)中的作用
        1.2.1 Wnt信號通路在炎癥反應(yīng)中作為一個古老通路中的新角色
        1.2.2 Wnt3a和Wnt5a作為兩個標(biāo)準(zhǔn)型Wnts在小鼠骨髓巨噬細(xì)胞Wnt/β-catenin信號中起著相反的作用
        1.2.3 Wnt信號在巨噬細(xì)胞中的調(diào)節(jié)作用
    1.3 肺臟上皮細(xì)胞的介紹
    1.4 肺臟上皮細(xì)胞中經(jīng)典Wnt信號的研究進(jìn)展
    1.5 結(jié)核分枝桿菌的介紹
    1.6
        1.6.1 TLR信號通路介紹
        1.6.2 TLR信號通路受體
        1.6.3 TLRs介導(dǎo)的信號通路
        1.6.4 MyD88
        1.6.5 MyD88依賴信號通路與MyD88非依賴信號通路
    1.7 在結(jié)核分枝桿菌感染中Wnt/β-catenin信號通路和炎癥反應(yīng)相互的調(diào)節(jié)作用
    1.8 本課題研究意義
第二章 結(jié)核分枝桿菌刺激對肺臟上皮細(xì)胞Wnt/β-catenin信號途徑的影響
    引言
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細(xì)胞系
        2.1.2 使用儀器
        2.1.3 主要試劑與載體
    2.2 實驗步驟與方法
        2.2.1 人肺臟上皮細(xì)胞A549細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2.2 用于X-gal染色對A549細(xì)胞的轉(zhuǎn)染
        2.2.3 X-gal染色液配制
        2.2.4 X-gal染色步驟
        2.2.5 用于雙熒光素酶檢測對A549細(xì)胞的轉(zhuǎn)染
        2.2.6 雙熒光素酶報告基因檢測方法
        2.2.7 人肺臟上皮細(xì)胞A549 RNA的提取及濃度測定
        2.2.8 cDNA的構(gòu)建
        2.2.9 Real Time PCR
        2.2.10 對目的基因PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測分析
        2.2.11 細(xì)胞全蛋白提取
        2.2.12 根據(jù)試劑盒說明提取細(xì)胞胞漿蛋白和細(xì)胞核蛋白
        2.2.13 測定不同處理A549細(xì)胞蛋白濃度
        2.2.14 蛋白質(zhì)印跡檢測
        2.2.15 MTT
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 A549細(xì)胞轉(zhuǎn)染結(jié)果
        2.3.2 β-半乳糖苷酶在A549細(xì)胞中的表達(dá)情況
        2.3.3 BCG和LPS刺激抑制上皮細(xì)胞中的經(jīng)典Wnt信號活性
        2.3.4 BCG感染對A549細(xì)胞中Wnt信號家族相關(guān)因子表達(dá)的影響
        2.3.5 BCG感染對A549細(xì)胞中Wnt信號家族相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
    2.4 討論
第三章 Wnt/β-catenin信號途徑對肺臟上皮細(xì)胞抗結(jié)核分枝桿菌感染中炎性反應(yīng)的作用及調(diào)控機(jī)制
    引言
    3.1 實驗材料
        3.1.1 細(xì)胞系
        3.1.2 使用儀器
        3.1.3 主要試劑
    3.2 實驗步驟和方法
        3.2.1 人肺臟上皮細(xì)胞A549細(xì)胞的培養(yǎng)
        3.2.2 雙熒光素酶檢測分析
        3.2.3 qPCR
        3.2.4 WesternBlot
        3.2.5 ELISA
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 Wnt/β-catenin負(fù)調(diào)控A549細(xì)胞中BCG和LPS刺激誘導(dǎo)的細(xì)胞炎癥反應(yīng)
        3.3.2 在肺臟上皮細(xì)胞A549中MyD88抑制Wnt/β-catenin信號通路
    3.4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
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本文編號：3779731