A類清道夫受體SR-A是主要表達于巨噬細胞上的模式識別受體,可與多種配體相結合,如氧化或化學修飾的低密度脂蛋白,細菌脂多糖（LPS）,磷壁酸及雙鏈RNA等。SR-A在機體識別、吞噬和清除病原體方面發(fā)揮著重要的固有免疫調控作用。除宿主防御外,SR-A在多種疾病中發(fā)揮重要作用,如動脈粥樣硬化和阿爾茲海默氏癥等。本文第一部分研究了SR-A在吸煙引起的COPD中的作用及機制,第二部分研究了SR-A在鉤端螺旋體感染中病原體與宿主相互作用的分子機制。慢性阻塞性肺疾�。–OPD）是以持續(xù)性氣流受限呈進行性發(fā)展的肺部疾病。COPD患病率和死亡率均較高,造成的疾病負擔嚴重。吸煙是引起COPD的主要環(huán)境因素,但遺傳因素在COPD的發(fā)生中亦發(fā)揮重要作用�；蚪M關聯(lián)研究發(fā)現(xiàn)清道夫受體SR-A基因多態(tài)性和COPD高風險率相關聯(lián)。但SR-A在COPD發(fā)生發(fā)展中具體發(fā)揮何種作用并不清楚。本文第一部分通過吸煙誘導COPD動物模型研究發(fā)現(xiàn),SR-A敲除(SR-A^-/-)小鼠與野生型（WT）小鼠相比出現(xiàn)更嚴重的COPD病理表現(xiàn)和肺功能損傷。通過對肺組織勻漿檢測脂質氧化水平,發(fā)現(xiàn)SR-A^-/... 

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
符號說明
第一章 SR-A在 COPD中發(fā)揮的作用
    緒論
    1.1 引言
    1.2 實驗材料
        1.2.1 實驗動物
        1.2.2 實驗用煙
        1.2.3 實驗細胞
        1.2.4 主要實驗試劑及試劑配制
        1.2.5 主要實驗器材及儀器
    1.3 實驗方法
        1.3.1 建立COPD小鼠模型
        1.3.2 測量小鼠肺功能
        1.3.3 提取小鼠原代肺泡巨噬細胞
        1.3.4 RNA抽提
        1.3.5 RNA反轉錄成cDNA
        1.3.6 Real-time PCR檢測基因表達
        1.3.7 組織石蠟包埋和HE染色
        1.3.8 Masson染色
        1.3.9 MDA測定
        1.3.10 制備香煙浸出液(CSE)
        1.3.11 CSE細胞毒性測定
        1.3.12 提取小鼠原代腹腔巨噬細胞
        1.3.13 CSE刺激小鼠原代腹腔巨噬細胞
        1.3.14 數(shù)據處理
    1.4 實驗結果
        1.4.1 香煙刺激后WT和 SR-A~(-/-)小鼠的肺功能
        1.4.2 香煙刺激后WT和 SR-A~(-/-)小鼠的肺部病理變化
        1.4.3 香煙刺激后WT和 SR-A~(-/-)小鼠的肺部脂質氧化水平
        1.4.4 香煙刺激后WT和 SR-A~(-/-)小鼠的肺泡巨噬細胞抗氧化基因表達情況
        1.4.5 確定最適香煙浸出液(CSE)刺激細胞濃度
        1.4.6 CSE刺激WT和 SR-A~(-/-)小鼠腹腔巨噬細胞后的細胞脂質氧化損傷
        1.4.7 CSE刺激WT和 SR-A~(-/-)小鼠腹腔巨噬細胞后的抗氧化基因表達
        1.4.8 CSE刺激WT和 SR-A~(-/-)小鼠腹腔巨噬細胞后的炎癥因子TNF-α的表達
    1.5 討論
第二章 SR-A在鉤端螺旋體感染中的致病機理研究
    緒論
    2.1 引言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 實驗菌株
        2.2.2 實驗動物
        2.2.3 實驗細胞
        2.2.4 主要實驗試劑及試劑配制
        2.2.5 主要實驗器材及儀器
    2.3 實驗方法
        2.3.1 鉤體培養(yǎng)
        2.3.2 鉤體固定
        2.3.3 鉤體計數(shù)
        2.3.4 細胞復蘇和傳代培養(yǎng)
        2.3.5 細胞凍存
        2.3.6 細胞計數(shù)
        2.3.7 過表達SR-A及對照GFP的 RAW264.7 穩(wěn)轉巨噬細胞系的構建
        2.3.8 Western Blot檢測巨噬細胞SR-A蛋白表達
        2.3.9 免疫熒光染色檢測巨噬細胞表面SR-A蛋白表達
        2.3.10 RAW264.7 細胞吞噬鉤體菌株56606v實驗
        2.3.11 巨噬細胞表面甘露糖受體封閉
        2.3.12 鉤體在小鼠腹腔巨噬細胞中存活實驗
        2.3.13 免疫熒光染色檢測巨噬細胞對鉤體的吞噬情況
        2.3.14 激光共聚焦顯微鏡對免疫熒光結果的觀察
        2.3.15 CCK-8 檢測原代腹腔巨噬細胞活性
        2.3.16 鉤體急性感染WT和 SR-A~(-/-)小鼠
        2.3.17 小鼠血清肝功能檢測
        2.3.18 小鼠感染鉤體3d后各組織中鉤體DNA的抽提
        2.3.19 抽取鉤體基因組DNA
        2.3.20 RNA抽提
        2.3.21 RNA反轉成cDNA
        2.3.22 Real-time PCR
        2.3.23 數(shù)據分析
    2.4 實驗結果
        2.4.1 過表達SR-A或對照載體的RAW264.7 細胞中SR-A蛋白表達水平的檢測
        2.4.2 過表達SR-A的 RAW264.7 巨噬細胞對鉤體的吞噬能力增加
        2.4.3 甘露糖受體不是鉤體56606v株的主要吞噬受體
        2.4.4 問號鉤體56606v株能在小鼠腹腔巨噬細胞中存活,而56606a株不能
        2.4.5 問號鉤體56606v株在SR-A~(-/-)小鼠腹腔巨噬細胞中的存活率低于WT細胞
        2.4.6 問號鉤體56606v株感染WT和 SR-A~(-/-)小鼠,WT小鼠表現(xiàn)為更嚴重的皮下出血和黃疸
        2.4.7 問號鉤體56606v株感染WT和 SR-A~(-/-)小鼠,SR-A~(-/-)小鼠表現(xiàn)為更輕微的肝功能損傷
        2.4.8 鉤體56606v株感染后,WT和 SR-A~(-/-)小鼠各組織中鉤體的分布情況
        2.4.9 鉤體56606v株感染后,在SR-A~(-/-)小鼠組織中的載量較低
    2.5 討論
全文總結
參考文獻
致謝
在讀碩士期間發(fā)表文章


【參考文獻】：
期刊論文
[1]清道夫受體A在COPD發(fā)病及進展為肺癌中的研究[J]. 謝梁,趙開順,周敏.  國際呼吸雜志. 2017 (12)
[2]慢性阻塞性肺疾病的發(fā)病機制及中醫(yī)治法的研究進展[J]. 閆玲玲,楊愛東.  中醫(yī)臨床研究. 2015(04)



本文編號：3730983