研究目的:瘧疾是由瘧原蟲引起的一種嚴(yán)重危害生命健康的全球性傳染疾病,其臨床癥狀主要是由瘧原蟲在宿主紅細(xì)胞內(nèi)的無性生長增殖所引起的。瘧原蟲有多種種屬,本文我們重點(diǎn)研究的是鼠源的伯氏瘧原蟲（Plasmodium berghei ANKA）,其可侵染鼠的正常紅細(xì)胞。成熟紅細(xì)胞無細(xì)胞器與細(xì)胞核,瘧原蟲侵入后可利用自身的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)合成并分泌大量不同功能的蛋白質(zhì)至紅細(xì)胞胞漿或胞膜,從而完成對(duì)紅細(xì)胞結(jié)構(gòu)的重塑,以利于瘧原蟲攝取營養(yǎng)物質(zhì)、進(jìn)行細(xì)胞粘附、或逃逸免疫清除等。前期研究表明,伯式瘧原蟲表達(dá)真核細(xì)胞保守的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白YOP1。YOP1通過誘導(dǎo)膜曲度來穩(wěn)定管狀內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu),缺失YOP1會(huì)影響內(nèi)質(zhì)網(wǎng)管狀網(wǎng)絡(luò),而管狀網(wǎng)絡(luò)又與蛋白質(zhì)分泌相關(guān)聯(lián)。本文旨在研究伯式瘧原蟲YOP1（PbYOP1）的缺失對(duì)其蛋白分泌及致病能力的影響,以便尋找干擾瘧原蟲蛋白質(zhì)合成與分泌的新方法,為瘧疾疫苗的研制提供可靠的理論依據(jù)。研究內(nèi)容:第一部分:利用野生型（wt）和YOP1缺失（△yop1）的伯式瘧原蟲分別感染W(wǎng)istar大鼠,通過伯式瘧原體外同步化培養(yǎng)技術(shù)得到大量發(fā)育至裂殖體時(shí)期的瘧原蟲化的紅細(xì)胞并同時(shí)富集未感染瘧原蟲的紅細(xì)胞。選用... 

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、伯氏瘧原蟲內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白YOP1的缺失對(duì)其蛋白質(zhì)分泌的影響
    1.1 對(duì)象和方法
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與瘧原蟲
        1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        1.1.3 主要的實(shí)驗(yàn)相關(guān)儀器
        1.1.4 實(shí)驗(yàn)主要溶液的配置
        1.1.5 伯式瘧原蟲的保存與復(fù)蘇
        1.1.6 伯式瘧原蟲的感染與鼠外周血蟲血率的測定
        1.1.7 伯式瘧原蟲的體外培養(yǎng)與純化
        1.1.8 紅細(xì)胞膜表面蛋白的提取-胰酶表面處理法
        1.1.9 紅細(xì)胞膜與瘧原蟲總蛋白的提取-低滲破膜法
        1.1.10 BCA法蛋白濃度測定
        1.1.11 聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)與考馬斯亮藍(lán)染色
        1.1.12 蛋白質(zhì)脫鹽
        1.1.13 iTRAQ法標(biāo)記質(zhì)譜蛋白樣品
        1.1.14 DMT法標(biāo)記質(zhì)譜蛋白樣品
        1.1.15 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 伯式瘧原蟲的體外培養(yǎng)與裂殖體的純化分離
        1.2.2 質(zhì)譜檢測裂殖體時(shí)期的紅細(xì)胞中紅細(xì)胞相關(guān)蛋白的變化(SS法)
        1.2.3 BCA法檢測PbYOP1缺失對(duì)瘧原蟲感染的紅細(xì)胞表面蛋白濃度的影響(SS法)
        1.2.4 質(zhì)譜檢測PbYOP1缺失對(duì)瘧原蟲蛋白質(zhì)分泌的影響(SS法)
        1.2.5 質(zhì)譜檢測PbYOP1缺失對(duì)瘧原蟲蛋白質(zhì)分泌的影響(HL法)
    1.3 討論
    1.4 小結(jié)
二、伯氏瘧原蟲內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白YOP1的缺失對(duì)其致病力的影響
    2.1 對(duì)象和方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與瘧原蟲
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要的實(shí)驗(yàn)相關(guān)儀器
        2.1.4 組織總RNA提取
        2.1.5 實(shí)時(shí)熒光定量(RT-PCR)技術(shù)
        2.1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 PbYOP1的缺失會(huì)降低患瘧鼠肝臟細(xì)胞炎癥相關(guān)因子的表達(dá)水平
        2.2.2 PbYOP1的缺失會(huì)降低患瘧鼠肝臟細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激分子的表達(dá)水平
        2.2.3 PbYOP1的缺失會(huì)降低患瘧鼠脾臟細(xì)胞炎癥相關(guān)因子的表達(dá)水平
        2.2.4 PbYOP1的缺失會(huì)降低患瘧鼠脾臟細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激分子的表達(dá)水平
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述 瘧原蟲分泌蛋白重塑宿主紅細(xì)胞的機(jī)制探討
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡歷



本文編號(hào)：3695499