目的:人類皮膚是由多種多樣的真菌種屬廣泛定植的。一些假絲酵母菌種屬,特別是白假絲酵母菌不僅作為共生菌定植于皮膚,還能通過在定植組織中不斷增殖誘發(fā)感染。然而皮膚屏障的抵抗機(jī)制是最為有效的,包括常駐的非免疫細(xì)胞及免疫細(xì)胞,還有被招募至感染部位的免疫細(xì)胞都參與到抵御微生物的活動(dòng)中。因此,皮膚是抵御真菌感染的有效屏障。目前大部分研究聚焦于假絲酵母菌與宿主上皮細(xì)胞的共生與致病性研究,主要圍繞口腔、胃腸道及陰道上皮細(xì)胞,但是對于假絲酵母菌與皮膚間相互作用的機(jī)制研究甚少。近幾十年內(nèi),細(xì)菌與真菌群落對人類皮膚的定植被廣泛研究,但是關(guān)于宿主與真菌間的互作關(guān)系了解不足。目前,不同的真菌包括馬拉瑟菌、隱球菌、紅色酵母菌及假絲酵母菌種屬被認(rèn)為是人類皮膚的共生菌。在原發(fā)性免疫缺陷的患者中,真菌多樣性,尤其是假絲酵母菌的富集在皮膚中明顯升高。雖然部分真菌是皮膚微生物組的共生菌,一些種屬還是具有致病性的。據(jù)統(tǒng)計(jì)20-25%的世界人口中受到真菌感染的影響。皮膚真菌感染的病原體可以分為兩類:皮膚癬菌及酵母菌,而假絲酵母菌屬于后者。在二百種已知的假絲酵母菌種屬中,只有熱帶假絲酵母菌和光滑假絲酵母菌在健康皮膚上常常被發(fā)現(xiàn),... 

【文章頁數(shù)】：158 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 :白假絲酵母菌多糖的提取、分離純化及鑒別
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 粗多糖提取
            2.2.2 DEAE-Sepharose FF柱分離純化
            2.2.3 白假絲酵母菌胞壁多糖的分子量測定
            2.2.4 白假絲酵母菌胞壁多糖的糖基分析
            2.2.5 白假絲酵母菌胞壁多糖的紫外光譜(UV)檢測
            2.2.6 白假絲酵母菌胞壁多糖的紅外光譜(FT-IR)檢測
            2.2.7 白假絲酵母菌胞壁多糖的核磁共振譜(NMR)檢測
    3 結(jié)果
        3.1 粗多糖提取的洗脫圖譜
        3.2 各組分均一度及分子量測定
        3.3 糖基組成分析
        3.4 NMR分析
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 :白假絲酵母菌胞壁多糖作用于小鼠巨噬細(xì)胞的組學(xué)分析
    1 前言
    2 材料及方法
        2.1 儀器、材料和試劑
        2.2 分析軟件
    3 結(jié)果
        3.1 轉(zhuǎn)錄組結(jié)果分析
            3.1.1 eggNOG Gr·oup分析
            3.1.2 表達(dá)差異基因分析
            3.1.3 表達(dá)差異GO富集分析
            3.1.4 表達(dá)差異KO分析
            3.1.5 KEGG富集分析
            3.1.6 差異基因的互作分析
            3.1.7 差異表達(dá)基因聚類分析
        3.2 蛋白組學(xué)分析結(jié)果
            3.2.1 差異蛋白在對照組與實(shí)驗(yàn)組中的分布
            3.2.2 差異表達(dá)蛋白質(zhì)GO富集分析
            3.2.3 差異蛋白的功能分析結(jié)果
            3.2.4 KEGG通路注釋
            3.2.5 差異表達(dá)蛋白質(zhì)KEGG通路富集分析
            3.2.6 蛋白質(zhì)聚類分析
            3.2.7 差異蛋白的互作分析
        3.3 轉(zhuǎn)錄組及蛋白組表達(dá)關(guān)聯(lián)分析
            3.3.1 定量關(guān)聯(lián)相關(guān)性分析
            3.3.2 定量關(guān)聯(lián)分類
            3.3.3 表達(dá)趨勢相同的差異蛋白及差異基因
            3.3.4 表達(dá)差異的蛋白及表達(dá)無差異的基因
            3.3.5 表達(dá)無差異的蛋白及表達(dá)差異的基因
            3.3.6 表達(dá)無差異的蛋白及表達(dá)無差異的基因
            3.3.7 關(guān)聯(lián)結(jié)果功能注釋
            3.3.8 GO注釋分析
            3.3.9 COG注釋
            3.3.10 Pathway注釋分析
            3.3.11 定量蛋白與基因聚類分析結(jié)果
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分 :白假絲酵母菌甘露糖蛋白通過AKT信號通路對巨噬細(xì)胞極化影響
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 儀器、材料和試劑
            2.1.1 儀器
            2.1.2 材料和試劑
            2.1.3 主要試劑配制
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 細(xì)胞傳代
            2.2.2 細(xì)胞凍存
            2.2.3 細(xì)胞復(fù)蘇
            2.2.4 提取細(xì)胞RNA
            2.2.5 c DNA的制備
            2.2.6 RT-PCR
            2.2.7 Western blot
            2.2.8 免疫組化
            2.2.9 Icelligence測試細(xì)胞增殖曲線
            2.2.10 小鼠朗格漢斯細(xì)胞的提取
            2.2.11 流式檢測細(xì)胞吞噬功能實(shí)驗(yàn)步驟
            2.2.12 流式檢測細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)步驟
            2.2.13 流式檢測細(xì)胞凋亡步驟
    3 結(jié)果
        3.1 白假絲酵母菌胞壁多糖作用小鼠巨噬細(xì)胞的數(shù)條通路
        3.2 白假絲酵母菌胞壁多糖刺激巨噬細(xì)胞的活化作用
            3.2.1 巨噬細(xì)胞向 M1 方向活化
            3.2.2 白假絲酵母菌多糖通過激活A(yù)KT信號通路,刺激巨噬細(xì)胞增殖、抑制凋亡
            3.2.3 白假絲酵母菌多糖通過激活A(yù)KT信號通路,增強(qiáng)巨噬細(xì)胞ROS及 NO的產(chǎn)生。
            3.2.4 白假絲酵母菌多糖刺激巨噬細(xì)胞后,增強(qiáng)其吞噬功能及殺菌能力
            3.2.5 白假絲酵母菌胞壁多糖甘露糖蛋白通過 AKT 信號通路激活巨噬細(xì)胞向 M1 極化
            3.2.6 白假絲酵母菌胞壁多糖通過AKT2 誘導(dǎo)M1 活化,通過AKT1及AKT2作用細(xì)胞周期及凋亡
        3.3 白假絲酵母菌胞壁多糖對小鼠皮膚內(nèi)巨噬細(xì)胞的影響
        3.4 小鼠朗格漢斯細(xì)胞的吞噬功能及成熟功能在白假絲酵母菌胞壁多糖的作用下的改變
        3.5 白假絲酵母菌胞壁多糖激活小鼠巨噬細(xì)胞的ERK通路
        3.6 白假絲酵母菌胞壁多糖激活小鼠巨噬細(xì)胞的NF-κB通路,上調(diào)TNFaIP2 表
        3.7 β(1,3)葡聚糖對巨噬細(xì)胞的作用通路
    4 討論
    5 結(jié)論
第四部分 :霍亂弧菌的毒力調(diào)控元ToxR通過錳離子轉(zhuǎn)運(yùn)體調(diào)控活性氧抗性
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 儀器、材料和試劑
            2.1.1 儀器及試劑
            2.1.2 材料
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3 結(jié)果
        3.1 霍亂弧菌的毒力缺失株在過氧化氫作用下存活率
        3.2 Transposon建立文庫在過氧化氫下篩選
        3.3 插入位點(diǎn)VC0022 引起抗過氧化能力提升
        3.4 建立mneA缺失株及toxR mneA雙基因缺失株
        3.5 mneA菌株在含有MnCl2 培養(yǎng)基中生長受限
        3.6 mneA菌株在Mn2+中生長受限可被Fe2+恢復(fù)
        3.7 mneA在 Mn2+的誘導(dǎo)下表達(dá)量增加
        3.8 toxR抑制mneA的表達(dá)
        3.9 補(bǔ)充的Mn2+可提升toxR的過氧化抗性
        3.10 百草枯產(chǎn)生的超氧化物對toxR殺傷力升高
        3.11 ompU缺失株的抗過氧化能力下降
        3.12 錳離子影響mneA的轉(zhuǎn)錄
        3.13 ROS熒光探針檢測各菌株內(nèi)ROS含量
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
在學(xué)期間科研成績
致謝
個(gè)人簡歷



本文編號：3667183