乙型肝炎是一種嚴重的全球性疾病,易引發(fā)肝硬化和肝癌。目前國內(nèi)外尚無顯著有效的乙肝治療方法,主要采用預防為主、治療為輔的方針。自從1981年第一代乙肝疫苗問世至今,乙型肝炎的蔓延得到有效地控制,全球肝癌的發(fā)生率下降了75%。目前全球廣泛使用的是利用基因工程技術在酵母和哺乳動物細胞中表達的乙肝病毒表面抗原S蛋白（HBsAg）疫苗,接種疫苗后約有10-15%的人群無應答或者低應答,且一般不能誘導細胞免疫應答。研制能克服現(xiàn)有乙肝疫苗缺陷的新型乙肝疫苗已成為一項迫切的研究課題。研究表明,在主蛋白抗原S的基礎上增加額外的HBV表面抗原能夠增強免疫原性,含前S蛋白的重組乙型肝炎疫苗是第三代乙肝疫苗研發(fā)的重點,有望替代現(xiàn)在廣泛使用的基因工程疫苗。本研究的研究思路是將乙肝病毒S抗原基因和preS1抗原表位（21-47位氨基酸）基因組合形成融合基因,在CHO細胞中實現(xiàn)S/preS1的穩(wěn)定高效表達。本研究采用轉錄水平調(diào)控為主、轉錄后調(diào)控為輔的表達載體設計思想,將S/preS1基因插入含有克服位置效應、細胞內(nèi)源性強啟動子及mRNA運輸及穩(wěn)定性調(diào)控元件的真核細胞表達載體,成功構建表達乙肝病毒S抗原和preS1抗... 

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
第一部分 高效表達乙肝表面抗原S/preS1重組CHO細胞系的構建
    1 材料
    2 方法
    3 結果
        3.1 S/preS1基因表達載體HMRCHEF53u/Neo-S/preS1的構建
        3.2 高效表達S/preS1 CHO細胞系的克隆篩選
        3.3 10G6細胞系表達S/preS1的抗原性分析
    4 討論
    5 結論
第二部分 10G6細胞的生長和代謝特征
    1 材料
    2 方法
    3 結果
        3.1 10G6細胞體外培養(yǎng)的形態(tài)
        3.2 10G6細胞有血清培養(yǎng)的細胞生長與代謝
        3.3 10G6細胞連續(xù)批次貼壁培養(yǎng)的S/preS1表達穩(wěn)定性
        3.4 10G6細胞無血清培養(yǎng)的細胞生長和代謝
        3.5 10G6細胞連續(xù)批次懸浮培養(yǎng)的細胞生長和S/preS1表達穩(wěn)定性
    4 討論
    5 結論
第三部分 10G6細胞系無血清培養(yǎng)工藝的建立
    1 材料
    2 方法
    3 結果
        3.1 培養(yǎng)溫度對10G6細胞生長和S/preS1表達的影響
        3.2 接種密度對10G6細胞生長和S/preS1表達的影響
        3.3 流加培養(yǎng)基對10G6細胞生長和S/preS1表達的影響
        3.4 起始流加時間對10G6細胞生長和S/preS1表達的影響
        3.5 10G6細胞在無血清流加培養(yǎng)中的細胞生長和S/preS1表達
        3.6 10G6細胞在1L生物反應器中流加培養(yǎng)
    4 討論
    5 結論
總結
參考文獻
致謝
發(fā)表論文


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3654288