目的擬原核表達淋病奈瑟菌NGO2105蛋白的Passenger結(jié)構(gòu)域并制備多克隆抗血清,初步分析其保守性及亞細胞定位。方法 PCR擴增Passenger結(jié)構(gòu)域編碼基因并克隆入pCold TF原核表達質(zhì)粒中,重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌E.coil DH5α,通過PCR和測序鑒定后,再將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3）菌中誘導表達目的蛋白,純化目的蛋白后免疫BALB/c小鼠以制備多克隆抗體。Western blot分析NGO2105蛋白在臨床分離菌株中的保守性。采用流式細胞技術(shù)分析淋病奈瑟菌中NGO2105蛋白Passenger結(jié)構(gòu)域細胞定位。結(jié)果成功表達出可溶形式的NGO2105蛋白Passenger結(jié)構(gòu)域,重組蛋白免疫小鼠后可獲得效價達到5.12×10⁵的多克隆抗血清,Western blot分析顯示Passenger抗血清能與不同臨床分離菌株中的NGO2105蛋白特異性反應,流式細胞技術(shù)分析顯示Passenger結(jié)構(gòu)域定位于淋病奈瑟菌菌體表面。結(jié)論成功獲得可溶形式表達的Passenger蛋白及其多克隆抗體,NGO2105蛋白在臨床分離的淋病奈瑟菌中有較好的保守性... 

【文章來源】：中國皮膚性病學雜志. 2020,34(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 菌株及質(zhì)粒
    1.2 實驗動物
    1.3 主要試劑
    1.4 方法
        1.4.1 引物設計
        1.4.2 PCR擴增目的基因
        1.4.3 pCold TF-Passenger重組質(zhì)粒的構(gòu)建、篩選及鑒定
        1.4.4 重組蛋白的誘導表達
        1.4.5 制備多克隆抗體及檢測抗體效價
        1.4.6 Western blot分析Passenger結(jié)構(gòu)域蛋白保守性
        1.4.7 流式細胞技術(shù)對Passenger結(jié)構(gòu)域蛋白定位分析
2 結(jié)果
    2.1 pCold TF-Passenger原核表達載體的構(gòu)建
    2.2 重組Passenger蛋白的誘導表達及純化
    2.3 抗Passenger蛋白多克隆抗血清制備及鑒定
    2.4 Passenger結(jié)構(gòu)域在淋病奈瑟菌臨床分離菌株中的保守性分析
    2.5 流式細胞技術(shù)對Passenger結(jié)構(gòu)域蛋白定位分析
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]淋球菌耐藥現(xiàn)狀及新藥研究進展[J]. 劉蘭蘭,田麗閃,袁軍,吳秋紅,李武,張莉,孫思,陳威英,羅珍冑.  中國艾滋病性病. 2019(03)
[2]淋球菌por,tbpB基因序列變異和系統(tǒng)進化探討[J]. 黃美容,黃健,閔迅,楊昌偉,張紹基,顏利江.  中國皮膚性病學雜志. 2015(12)
[3]遵義地區(qū)淋病奈瑟菌多抗原序列分型及耐藥性分析[J]. 黃健,黃美容,於薇,黃婭婭,陳澤慧,陳安林,閔迅.  臨床檢驗雜志. 2014(10)



本文編號：3629827