目的篩選細(xì)粒棘球絳蟲原頭蚴抗原分子Eg-00512,并進行重組表達、純化及免疫特性鑒定,以期作為棘球蚴病特異性診斷抗原。方法對國家人類基因組南方研究中心（CHGCS）發(fā)表的細(xì)粒棘球絳蟲4個不同發(fā)育階段的表達譜數(shù)據(jù)進行差異比較分析,篩選僅在原頭蚴階段特異表達的基因Eg-00512;利用DNAStar軟件包對其編碼蛋白Eg-00512進行抗原表位分析;選取合適的序列片段作為目的片段,構(gòu)建基因工程菌株Eg-00512/pET-24a/BL-21,經(jīng)誘導(dǎo)表達、純化獲得重組蛋白rEg-00512。將BALB/c小鼠隨機分為免疫組、佐劑對照組、PBS對照組,分別經(jīng)皮下多點注射重組蛋白、PBS+弗氏佐劑和PBS,2周后加強免疫一次。分別于免疫前,第一次免疫后2、4周每組小鼠尾靜脈采血,免疫后5周摘眼球法采血,采用ELISA檢測各時間點血清中特異性IgG抗體水平變化;以該血清為一抗,采用Western blot分析重組蛋白的免疫反應(yīng)性。結(jié)果篩選出僅在細(xì)粒棘球蚴原頭蚴階段高表達的Eg-00512基因。該基因編碼203個氨基酸,分子質(zhì)量單位為23ku,其抗原表位主要位于1-15、55-93、111-119... 

【文章來源】：中國病原生物學(xué)雜志. 2017,12(01)北大核心CSCD

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圖２重組質(zhì)粒ｒＥｇ－００５１２的酶切鑒定ＭＤＮＡ標(biāo)志物１重組質(zhì)粒ＳｍａⅠ和ＸｈｏⅠ雙酶切２重組質(zhì)粒ｒＥｇ－００５１２

ＮＡ標(biāo)志物１重組質(zhì)粒ＳｍａⅠ和ＸｈｏⅠ雙酶切２重組質(zhì)粒ｒＥｇ－００５１２圖２重組質(zhì)粒ｒＥｇ－００５１２的酶切鑒定ＭＤＮＡｍａｒｋｅｒ１ＰｌａｓｍｉｄｄｉｇｅｓｔｅｄｂｙＳｍａＩａｎｄＸｈｏⅠ２ＰｌａｓｍｉｄＤＮＡＦｉｇ．２ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｒＥｇ－００５１２ｂｙｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｅｎｚｙｍｅｓｄｉｇｅｓｔｉｏｎＭ蛋白標(biāo)志物１未誘導(dǎo)陰性對照２誘導(dǎo)后全菌３超聲破碎上清４超聲破碎沉淀５純化重組蛋白ｒＥｇ－００５１２圖３重組蛋白ｒＥｇ－００５１２的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析ＭＰｒｏｔｅｉｎｍａｋｅｒ１Ｕｎｉｎｄｕｃｅｄｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ２Ａｌｌｂａｃ－ｔｅｒｉａａｆｔｅｒｉｎｄｕｃｔｉｏｎ３Ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔｏｆｓｏｎｉｃａｔｉｏｎｌｙｓａｔｅ４Ｓｅｄｉ－ｍｅｎｔｏｆｓｏｎｉｃａｔｉｏｎｌｙｓａｔｅ５ＰｕｒｆｉｅｄｒＥｇ－００５１２ａｆｔｅｒｄｉａｌｙｓｉｓＦｉｇ．３ＳＤＳ－ＰＡＧＥａｎａｌｙｓｉｓｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｔｅｉｎｒＥｇ－００５１２５小鼠血清特異性ＩｇＧ抗體水平重組蛋白ｒＥｇ－００５１２首次免疫小鼠兩周，小鼠血清特異性ＩｇＧ抗體水平開始升高，加強免疫后特異性ＩｇＧ抗體水平隨時間延長顯著升高，５周時達到高峰（Ａ４５０值為１．８０７±０．７６７），與佐劑對照組（０．１１１±０．０１４）和ＰＢＳ對照組（０．１３２±０．０２４６）相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ＜０．０１）；佐劑組和ＰＢＳ對照組的ＩｇＧ抗體水平無顯著變化（Ｐ＞０．０１）（圖４）。６重組蛋白ｒ

≡?逡資艿剿拗饕蚋腥舅?盞疾??拿庖哂Υ鸕墓?擊，終止其生長發(fā)育。只有較少數(shù)的病原體能突破宿主的免疫保護，成功逃逸，繼而發(fā)育形成病灶。新疆福海縣居民普查結(jié)果顯示，血清抗體陽性率高達２１．３％而棘球蚴病患病率為２．９％［１５］。高血清抗體陽性率低患病率給棘球蚴病的確診帶來了困難［１６］。患者在尚未診斷明確的情況下盲目用藥，既無法確定用藥的合適時機，又無法在短期內(nèi)判斷治療效果，所以!需敏感性和特異性特異性高的診斷抗原分子［１７］。圖４小鼠血清抗ｒＥｇ－００５１２ＩｇＧ抗體水平的變化Ｆｉｇ．４Ｋｉｎｅｔｉｃｓｏｆｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｔｉ－ｒＥｇ－００５１２ＩｇＧｉｎｍｕｒｉｎｅｓｅｒａＭ蛋白標(biāo)志物１ｒＥｇ－００５１２與細(xì)粒棘球蚴感染小鼠血清反應(yīng)條帶２ｒＥｇ－００５１２與免疫組小鼠血清反應(yīng)條帶３ＰＢＳ對照組小鼠血清圖５對組蛋白ｒＥｇ－００５１２的Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鑒定ＭＰｒｏｔｅｉｎｍａｋｅｒ１Ｓｅｒｕｍｏｆｓｅｃｏｎｄａｒｙｉｎｆｅｃｔｉｏｎ２Ｓｅｒｕｍｏｆｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎｇｒｏｕｐ３ＳｅｒｕｍｏｆＰＢＳｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐＦｉｇ．５ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎａｌｙｓｉｓｏｆｒＥｇ－００５１２ｗｉｔｈＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ近年來隨著分子生物學(xué)技術(shù)和生物信息學(xué)的迅速·４９·中國病原生物學(xué)雜志ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰａｔｈｏｇｅｎＢｉｏｌｏｇｙ２０１７年１月第１２卷第１期Ｊａｎｕａｒｙ２０１７，Ｖｏｌ．１２，Ｎｏ．１

【參考文獻】：
期刊論文
[1]細(xì)粒棘球絳蟲原頭節(jié)抗原分子Eg-01883的克隆、表達及免疫原性分析[J]. 趙殷奇,李子華,王浩,朱明星,牛楠,王婭娜,趙嘉慶,李娜,佟雪琪,宋佳卉,趙巍.  中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2016(03)
[2]全國重點寄生蟲病的防控形勢與挑戰(zhàn)[J]. 嚴(yán)俊,胡桃,雷正龍.  中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2015(06)
[3]金標(biāo)免疫層析讀數(shù)儀在棘球蚴病抗體檢測中的應(yīng)用[J]. 謝貴林,殷軍霞,段新宇,馮曉輝,王洋,蔣凱,陳新梅.  中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2015(03)
[4]棘球蚴病流行病學(xué)研究進展[J]. 齊顏鳳,伍衛(wèi)平.  中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2013(02)
[5]CD169基因及其蛋白性質(zhì)和結(jié)構(gòu)的生物信息學(xué)分析[J]. 周傲,陳星,張瀅寅,張淑君.  中國農(nóng)學(xué)通報. 2011(26)
[6]Epidemiological Studies on Cystic Echinococcosis in China─A Review[J]. CHAI JUN-JIE(National Hydatid Disease Center of China, Xnjiang Institute for Endemic Diseases Control and Research, Urumqi Xinjiang China 830002).  Biomedical and Environmental Sciences. 1995(02)
[7]包蟲(棘球蚴)病在我國的流行情況[J]. 棘球蚴病研究協(xié)作組.  新疆農(nóng)業(yè)科學(xué). 1989(03)



本文編號：3612045