研究背景乙型肝炎病毒（HBV）感染可引起急、慢性肝炎,肝衰竭,肝硬化及肝癌等疾病,嚴(yán)重影響全球人類衛(wèi)生健康。經(jīng)核苷（酸）類似物（NUC）抗病毒治療后可明顯改善患者病情。近年,高通量測(cè)序技術(shù)的出現(xiàn),能使T細(xì)胞受體（TCR）文庫(kù)方面的研究更加全面且深入。然而,針對(duì)NUC治療前后肝內(nèi)淋巴細(xì)胞TCR文庫(kù)的變化未闡明。研究目的本研究采用5’端cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)（5’-RACE）擴(kuò)增TCR β鏈片段,利用Illumina平臺(tái)進(jìn)行高通量測(cè)序,深度分析經(jīng)NUC治療后肝內(nèi)淋巴細(xì)胞TCR文庫(kù)的變化,以及發(fā)生乙型肝炎e抗原（HBeAg）血清學(xué)轉(zhuǎn)換與否和TCR文庫(kù)變化的聯(lián)系。研究方法1.研究對(duì)象本研究選取12例慢性乙型肝炎（CHB）患者,收集NUC治療前后血清及肝組織穿刺標(biāo)本。根據(jù)104周是否發(fā)生HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換分為轉(zhuǎn)換（SR）組（n=6）及非轉(zhuǎn)換（NSR）組（n=6）。2.TCR文庫(kù)構(gòu)建及測(cè)序?qū)ρ鍢?biāo)本行HBV血清學(xué)標(biāo)志物及血清轉(zhuǎn)氨酶、HBV DNA等檢測(cè);對(duì)肝組織穿刺標(biāo)本,提取總RNA,運(yùn)用5’-RACE逆轉(zhuǎn)錄及巢式PCR技術(shù)擴(kuò)增TCR β鏈,構(gòu)建測(cè)序文庫(kù),利用Illumina Hiseq平臺(tái)行... 

【文章來(lái)源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁(yè)數(shù)】：73 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖３－１入組患者ＨＢＶ血清學(xué)指標(biāo)及ＨＢＶＤＮＡ在抗病毒治療過(guò)程中變化（＊，?Ｐ＜０．０５；??＜

ｏｏｇｏｏ－－－－－??Ｊ?ｇｅｎｅ??■ｚ－ｊ?－Ｊ?ｆ＾ＦＲａＩ４??ｌＥ＝ｄｉ＝＾ｉ＝ｉｉｉ｜２??＝?ｍ?＝：：！??＝‘二＝＝ｆ?ＪＥｂｔ?—＝｛ｉ——頂說(shuō)?３??＾ｐｖｈ４＝ｆｈ?Ｍ?Ｉ－Ｈｔ：；５?＿??■Ｕ－Ｄ＾ｎｏＴＴＪ＾ＤｌＪ－ＤＴＤ＇ＤｎＤ?＿Ｄｔ３－ＤＴ３＂ＯＴＪ１３＿ＯＴＩ＇Ｕ＿Ｄ－Ｄ?｜｜?￣２??ｒ?Ｉ４＂?ｌ０５?Ｉ？?Ｓ?，５?ｉ?＾?｜Ｗ?＾?１°?Ｉ００?１°?Ｏ?，ｉ３?，５?＾?＾??ＭＭ那｜丨丨丨｜蕓招招｜?｜故?｜?４??圖３－３納入患者肝穿組織ＴＣＲ?Ｖｐ及Ｊｐ基因片段使用頻率熱圖??（Ｙ軸為各個(gè)基因片段名稱，Ｘ軸為患者樣本編號(hào)；圖右側(cè)的漸變色尺表示熱圖中不同顏色??的頻率；ＳＲ?組：Ｐ２、Ｐ５、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１２、Ｐ１５，?ＮＳＲ?組：Ｐ３、Ｐ４、Ｐ６、Ｐ８、Ｐ１３、Ｐ１４）??Ｆｉｇｕｒｅ?３－３?Ｈｅａｔｍａｐ?ｏｆ?Ｖｐ?ａｎｄ?ｊｐ?ｇｅｎｅ?ｓｅｇｍｅｎｔｓ?ｕｓａｇｅ?ｉｎ?ｌｉｖｅｒ?ｂｉｏｐｓｙ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｅｎｒｏｌｌｅｄ?ｐａｔｉｅｎｔｓ??２９??

８－?＿?，?０．５．?？？??＿■?■?Ｓ?■??＿■??Ｕ４?０．６－?？?ｉｕ?０．６－?ＵＪ?５??Ｓ?－＊＊－?■?ｇ?？?８！?〇■〇■?？??ｚ?０．４－?？?Ｚ?０．４－?？?■?２?＞??ｎ９???ｎｏ???■?００?－０．５－?■??０Ｊ．?？?■■?〇丨■?？??ｏ．ｏ－ｌ?１?＊??０．０－＊?？?＿??－１．０－１?１?．???ＳＲ?ＮＳＲ?ＳＲ?ＮＳＲ?ＳＲ?ＮＳＲ??圖３－６比較基線及１０４周ＳＲ組與ＮＳＲ組ＴＣＲ文庫(kù)多樣性的差異??（Ａ、Ｂ、Ｃ分別表示在總體、ＳＲ組、ＮＳＲ組中基線與１０４周ＴＣＲ文庫(kù)多樣性；Ｄ、Ｅ??分別表示在基線、１０４周時(shí)ＳＲ組與ＮＳＲ組ＴＣＲ文庫(kù)多樣性；Ｆ表示ＳＲ組與ＮＳＲ組從基??線到１０４周ＴＣＲ文庫(kù)多樣性的變化）??Ｆｉｇｕｒｅ?３－６?Ｔｈｅ?ＴＣＲ?ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ?ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ＳＲ?ａｎｄ?ＮＳＲ?ｇｒｏｕｐ?ａｔ?ｂａｓｅｌｉｎｅ?ａｎｄ?ｗｅｅｋ??１０４??３．３．５．?ＴＣＲ文庫(kù)相似性分析??為分析基線與１０４周Ｔ細(xì)胞文庫(kù)相似性，我們計(jì)算同一患者基線及１０４周均??有出現(xiàn)的克隆比例，稱為共有克隆型比例（兩時(shí)間點(diǎn)共有克隆型頻數(shù)／兩時(shí)間點(diǎn)??總ＣＤＲ３克隆型頻數(shù)）。我們發(fā)現(xiàn)，除外Ｐ１５患者共有克隆數(shù)達(dá)２２．５％，其余患??者共有克隆比例較低，甚至無(wú)共有克�。ǜ綀D３）。提示肝穿組織Ｔ細(xì)胞個(gè)體差??異較大，也因肝穿組織體積較小，隨機(jī)性大，從而導(dǎo)致共有克隆少見。經(jīng)統(tǒng)計(jì)??分析，ＳＲ組與ＮＳＲ組共有克隆比例無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（圖３－７）。??３３?

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Clinical characteristics and current management of hepatitis B and C in China[J]. Yong-Tao Sun,Yue-Xin Zhang,Hong Tang,Qing Mao,Xiao-Zhong Wang,Ling-Yi Zhang,Hong Chen,Ying-Na Zhong,Shu-Mei Lin,Da-Zhi Zhang.  World Journal of Gastroenterology. 2014(37)



本文編號(hào)：3610504