腸道病毒EV71的腸道感染途徑和免疫激活特性初探
發(fā)布時(shí)間：2022-01-14 23:14
腸道病毒EV71不僅是引起嬰幼兒手足口病的主要病原體之一,也能夠引起病毒性腦炎、病毒性肺炎、無菌性腦膜炎和心肌炎等病癥,嚴(yán)重時(shí)甚至導(dǎo)致死亡。所以近些年來,EV71的致病機(jī)理、重要結(jié)構(gòu)蛋白的作用、抗病毒藥物篩選、抗病毒天然免疫機(jī)制、疫苗的研發(fā),以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染機(jī)制等長期都是研究的熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)室已通過一日齡ICR乳鼠的動(dòng)態(tài)感染模型證明,小腸是EV71進(jìn)入人體、復(fù)制增殖的第一階段。本論文首先構(gòu)建并純化高滴度的帶GFP綠色熒光標(biāo)記的EV71重組病毒顆粒,以此作為研究材料,口腔灌注新生乳鼠,并感染不同種典型腸細(xì)胞CCD18-Co、DLD-1和FHC,探究EV71感染小腸的具體部位和易感腸細(xì)胞類型。通過實(shí)驗(yàn),最終驗(yàn)證了小腸中的空腸是EV71感染復(fù)制的主要部位,且EV71對腸上皮細(xì)胞和腸纖維細(xì)胞都有較強(qiáng)的感染效果,尤其是腸上皮細(xì)胞。同時(shí)本研究還構(gòu)建了SCARB2缺陷型易感細(xì)胞,以便觀察EV71感染效果的差異,并證明了 SCARB2受體在EV71感染中發(fā)揮重要作用。接著從體內(nèi)外水平檢測腸吸收抑制劑阿卡波糖和促進(jìn)劑癸酸鈉對于EV71感染小腸的影響,經(jīng)乳鼠口腔灌喂、Quantitative real-...
【文章來源】：武漢大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：66 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
圖１－１ＥＶ７１病毒三維結(jié)構(gòu)圖丨９］，其中藍(lán)色部分為ＶＰ１蛋白，綠色部分為ＶＰ２衣殼蛋白，紅色部分為ＶＰ３??結(jié)構(gòu)蛋白，洋紅色點(diǎn)狀物為鈣離子，橙色部分為口袋因子
己有研宄表明，ＣｓＣｌ溶液中，ＥＶ７１病毒顆粒浮力密度為１．３４ｇ／ｍｌ｜３９Ｉ。所以經(jīng)??ＣｓＣｌ密度梯度超高速離心后，于１．２ｇ／ｍ丨和１．４ｇ／ｍｌ的ＣｓＣｌ溶液的界面之間，出??現(xiàn)的一條肉眼可見的乳白色帶狀物，即為ＥＶ７１病毒顆粒帶，如下圖２－４所示。??遏ｈ??圖２＞４?ＥＶ７Ｉ－ＧＦＰ純化濃縮結(jié)果圖??２．３．２?ＥＶ７１－ＧＦＰ滴度測定的結(jié)果??持續(xù)觀察％ｈ發(fā)現(xiàn)，ＲＤ細(xì)胞被感染７２ｈ后，病毒濃度較高的孔出現(xiàn)完全的ＣＰＥ，??也有綠色熒光，而病毒濃度較低的孔，則沒有出現(xiàn)ＣＰＥ，組間差異明顯故有區(qū)分??度，組內(nèi)差異不大故具有可信度，是統(tǒng)計(jì)的最佳時(shí)刻，用Ｒｅｅｄ－Ｍｕｅｎｃｈ兩氏法計(jì)??算滴度如下：??表２－１?ＥＶ７１－ＧＦＰ病毒滴度記錄表??病毒稀釋度ＣＰＥ孔數(shù)無ＣＰＥ孔數(shù)?Ｍ?＋?ＣＰＥ孔＾＾百５Ｈ匕??ＣＰＥ孔數(shù)無ＣＰＥ孔數(shù)?（７°??１〇－＇?８?０?３７?０?１００?（３７／３７）??１０＇２?８?０?２９?０?１００?（２９／２９）??１〇－３?７?０?２１?０?１００?（２１／２１）??１０＇４?８?０?１４?０?１００
，不加ＥＶ７１也不給藥）。??后的細(xì)胞聚合度達(dá)到６０？８０％時(shí)，吸走孔中原有培養(yǎng)基添加４ｍｌ含２％ＦＢＳ的相應(yīng)完全生長培養(yǎng)基，同時(shí)Ａ組）和阿卡波糖藥液，Ｂ組加入等量病毒濃縮液（ＭＯＩ＝３）和量病毒濃縮液（ＭＯＩ＝３），Ｄ組加入與ＡＢＣ組中病毒濃基，然后輕晃平板使病毒均勻接觸到底部的所有細(xì)胞，置／〇Ｃ０２）中繼續(xù)培養(yǎng)；??Ｂ檢測：感染３６ｈ后收集三種腸細(xì)胞共計(jì)１２組，制備蛋一一上樣電泳一一轉(zhuǎn)膜——孵育相應(yīng)抗體一一顯影，具以這里不再詳細(xì)描述。??果及分析??ｔｉｔａｔｉｖｅ?ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣＲ檢測ＥＶ７１在小腸中的動(dòng)態(tài)分布結(jié)乳鼠如下圖所示：??
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]手足口病防控策略探討[J]. 卞蓮蓮,蘇瑤,毛群穎,吳星. 微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展. 2018(01)
[2]手足口病治療進(jìn)展[J]. 龔靈. 世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘. 2017(84)
[3]幼兒園手足口病防控策略監(jiān)督與指導(dǎo)淺析[J]. 劉桂杰. 中西醫(yī)結(jié)合心血管病電子雜志. 2017(27)
[4]狂犬病人免疫球蛋白在臨床上的應(yīng)用[J]. 姚瓊,顧克有. 中國疫苗和免疫. 2009(04)
碩士論文
[1]健康管理理念在手足口病防控中的應(yīng)用研究[D]. 尹穎.南京醫(yī)科大學(xué) 2011
本文編號(hào)：3589404
【文章來源】：武漢大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：66 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
圖１－１ＥＶ７１病毒三維結(jié)構(gòu)圖丨９］，其中藍(lán)色部分為ＶＰ１蛋白，綠色部分為ＶＰ２衣殼蛋白，紅色部分為ＶＰ３??結(jié)構(gòu)蛋白，洋紅色點(diǎn)狀物為鈣離子，橙色部分為口袋因子
己有研宄表明，ＣｓＣｌ溶液中，ＥＶ７１病毒顆粒浮力密度為１．３４ｇ／ｍｌ｜３９Ｉ。所以經(jīng)??ＣｓＣｌ密度梯度超高速離心后，于１．２ｇ／ｍ丨和１．４ｇ／ｍｌ的ＣｓＣｌ溶液的界面之間，出??現(xiàn)的一條肉眼可見的乳白色帶狀物，即為ＥＶ７１病毒顆粒帶，如下圖２－４所示。??遏ｈ??圖２＞４?ＥＶ７Ｉ－ＧＦＰ純化濃縮結(jié)果圖??２．３．２?ＥＶ７１－ＧＦＰ滴度測定的結(jié)果??持續(xù)觀察％ｈ發(fā)現(xiàn)，ＲＤ細(xì)胞被感染７２ｈ后，病毒濃度較高的孔出現(xiàn)完全的ＣＰＥ，??也有綠色熒光，而病毒濃度較低的孔，則沒有出現(xiàn)ＣＰＥ，組間差異明顯故有區(qū)分??度，組內(nèi)差異不大故具有可信度，是統(tǒng)計(jì)的最佳時(shí)刻，用Ｒｅｅｄ－Ｍｕｅｎｃｈ兩氏法計(jì)??算滴度如下：??表２－１?ＥＶ７１－ＧＦＰ病毒滴度記錄表??病毒稀釋度ＣＰＥ孔數(shù)無ＣＰＥ孔數(shù)?Ｍ?＋?ＣＰＥ孔＾＾百５Ｈ匕??ＣＰＥ孔數(shù)無ＣＰＥ孔數(shù)?（７°??１〇－＇?８?０?３７?０?１００?（３７／３７）??１０＇２?８?０?２９?０?１００?（２９／２９）??１〇－３?７?０?２１?０?１００?（２１／２１）??１０＇４?８?０?１４?０?１００
，不加ＥＶ７１也不給藥）。??后的細(xì)胞聚合度達(dá)到６０？８０％時(shí)，吸走孔中原有培養(yǎng)基添加４ｍｌ含２％ＦＢＳ的相應(yīng)完全生長培養(yǎng)基，同時(shí)Ａ組）和阿卡波糖藥液，Ｂ組加入等量病毒濃縮液（ＭＯＩ＝３）和量病毒濃縮液（ＭＯＩ＝３），Ｄ組加入與ＡＢＣ組中病毒濃基，然后輕晃平板使病毒均勻接觸到底部的所有細(xì)胞，置／〇Ｃ０２）中繼續(xù)培養(yǎng)；??Ｂ檢測：感染３６ｈ后收集三種腸細(xì)胞共計(jì)１２組，制備蛋一一上樣電泳一一轉(zhuǎn)膜——孵育相應(yīng)抗體一一顯影，具以這里不再詳細(xì)描述。??果及分析??ｔｉｔａｔｉｖｅ?ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣＲ檢測ＥＶ７１在小腸中的動(dòng)態(tài)分布結(jié)乳鼠如下圖所示：??
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]手足口病防控策略探討[J]. 卞蓮蓮,蘇瑤,毛群穎,吳星. 微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展. 2018(01)
[2]手足口病治療進(jìn)展[J]. 龔靈. 世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘. 2017(84)
[3]幼兒園手足口病防控策略監(jiān)督與指導(dǎo)淺析[J]. 劉桂杰. 中西醫(yī)結(jié)合心血管病電子雜志. 2017(27)
[4]狂犬病人免疫球蛋白在臨床上的應(yīng)用[J]. 姚瓊,顧克有. 中國疫苗和免疫. 2009(04)
碩士論文
[1]健康管理理念在手足口病防控中的應(yīng)用研究[D]. 尹穎.南京醫(yī)科大學(xué) 2011
本文編號(hào)：3589404
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