目的:本研究分析臨床上血清HBsAg陰性、HBV DNA陽(yáng)性的HBV隱匿性感染的血清學(xué)標(biāo)志物表達(dá)模式,評(píng)價(jià)CIA法的檢測(cè)性能。通過(guò)對(duì)OBI標(biāo)本HBV S區(qū)基因特別是“α”決定簇內(nèi)核苷酸的測(cè)序,分析HBV S區(qū)基因突變導(dǎo)致的氨基酸替換現(xiàn)象。進(jìn)一步分析本地區(qū)HBV S區(qū)基因高頻突變位點(diǎn),及流行病學(xué)數(shù)據(jù),探討造成OBI的原因及其病理生理學(xué)機(jī)制。方法:本研究分為兩個(gè)部分。第一部分:收集臨床上HBcAb陽(yáng)性、HBsAg陰性的五組血清學(xué)模式血清樣本1527例,通過(guò)ELISA復(fù)篩HBcAb從中選擇OD450nm值<0.070的樣本,采用高敏PCR檢測(cè)試劑盒檢測(cè)HBV DNA。第二部分:收集第一部分研究中經(jīng)HBV DNA檢測(cè)陽(yáng)性的OBI組樣本和HBV DNA高載量的慢乙肝病人對(duì)照組樣本。使用兩輪PCR擴(kuò)增技術(shù)擴(kuò)增篩選出的OBI臨床樣本HBV S區(qū)基因全長(zhǎng),通過(guò)對(duì)PCR產(chǎn)物直接測(cè)序或克隆測(cè)序?qū)BV S區(qū)基因進(jìn)行核苷酸序列分析,將得到的S區(qū)基因序列與相應(yīng)基因亞型的參考序列進(jìn)行比對(duì)分析,獲得各樣本HBV S區(qū)基因突變及氨基酸變異的情況。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)學(xué)分析... 

【文章來(lái)源】：蚌埠醫(yī)學(xué)院安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】：81 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

巢式PCR引物P1、P2和P3的選擇28

圖 3、引物 P3、P4 和 P5 對(duì) HBV S 區(qū) PCR 擴(kuò)增結(jié)果 為 DL2000 分子量標(biāo)記物；1~2 號(hào)泳道為樣本 S2 使用引物 P3，退火溫度 55℃和電泳結(jié)果；B.1~4 號(hào)泳道為樣本 S2 使用引物 P4 退火溫度 55℃和 58℃，引℃和 58℃ PCR 產(chǎn)物電泳結(jié)果。述三對(duì)引物（P2、P3、P5）經(jīng)驗(yàn)證都可成功擴(kuò)增出 HBV S 區(qū)基CR 技術(shù)進(jìn)行三輪擴(kuò)增，第一輪擴(kuò)增引物為 P3（F3-16 R3-1090），為 P2（F2-101 R2-861），第三輪擴(kuò)增引物為 P5（F5-146 R5-861）30

圖 2、引物 P2 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物（800bp 左右）測(cè)序結(jié)果經(jīng) BLAST 比對(duì)結(jié)果圖 3、引物 P3、P4 和 P5 對(duì) HBV S 區(qū) PCR 擴(kuò)增結(jié)果.M 為 DL2000 分子量標(biāo)記物；1~2 號(hào)泳道為樣本 S2 使用引物 P3，退火溫度 55℃和 58℃的

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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