蛋白質(zhì)的S-棕櫚�；揎検且环N重要的翻譯后修飾,其動態(tài)性和唯一的可逆性賦予了蛋白豐富的生理功能。棕櫚酰化修飾對于病毒侵染宿主細胞具有重要作用,它是通過影響病毒蛋白在細胞膜上的定位和聚集來影響宿主細胞的感染過程,這在甲型流感病毒中已有研究。棕櫚酰化修飾蛋白主要分布在腦組織中,能夠調(diào)節(jié)神經(jīng)元蛋白的功能,其含量的異常與神經(jīng)系統(tǒng)疾病密切相關(guān)。而狂犬病作為一種人獸共患惡性傳染病,有80%的病例為腦性狂犬病,在體內(nèi)顯示出強神經(jīng)噬性,研究狂犬病小鼠腦組織中的棕櫚酰化修飾蛋白,對理解狂犬病病毒感染過程具有重要意義。目前,對棕櫚�；揎椀鞍椎难芯恐饕蕾囉邗；�-生物素交換法（Acyl-Biotin Exchange,ABE）,該方法通過羥胺（HA）切割目的蛋白從而暴露出新的巰基位點,將帶有生物素的巰基反應(yīng)試劑與巰基進行反應(yīng),最后利用鏈霉親和素瓊脂糖凝珠對生物素化蛋白進行純化富集,實現(xiàn)棕櫚�；揎椀鞍椎臋z測。但該方法假陽性率高,且修飾位點定位不準確,這些缺點極大限制了棕櫚酰化修飾蛋白的研究與應(yīng)用。本論文對傳統(tǒng)ABE方法進行改進,建立了一種可靠性較高的棕櫚酰化修飾蛋白分析方法,并成功應(yīng)用于狂犬病小鼠模型中。... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

棕櫚�；揎椀鞍自谏锨搴统恋碇械姆植记闆r

TCEP前處理對ABE反應(yīng)的影響

第2章棕櫚酰化蛋白分析方法的建立與應(yīng)用18圖2.2TCEP前處理對ABE反應(yīng)的影響2.3.3瓊脂糖凝珠富集實驗的檢測將經(jīng)過ABE反應(yīng)的蛋白留取少部分樣本記作Input，剩余大部分樣本與鏈霉親和素瓊脂糖凝珠進行特異性結(jié)合，室溫翻轉(zhuǎn)2h，500g離心5min，收集離心后的上清記作Super，將洗脫后的蛋白樣本記作Pull。分別將Input、Super、Pull三組的+HA樣本和-HA樣本進行Western反應(yīng)。結(jié)果如圖2.3所示，Super組出現(xiàn)了較為明顯的條帶信號，表明部分蛋白沒有被瓊脂糖凝珠結(jié)合而是保留在上清中。同時，Pull組沒有出現(xiàn)信號條帶，證明經(jīng)富集切割后的樣品不能被Western-Biotin檢測，與理論相符合。傳統(tǒng)方法不能實現(xiàn)對富集蛋白在質(zhì)譜測試前的及時監(jiān)控，需要開發(fā)新的檢測手段以保障質(zhì)譜檢測的高效性。圖2.3富集蛋白瓊脂糖凝珠的檢測圖2.4傳統(tǒng)法[70]與煮沸法流程圖

【參考文獻】：
期刊論文
[1]熒光碳量子點的特性及檢測巰基化合物的研究進展[J]. 董小綺,菅曉婷,柴雙雙,楊江華,肖雪棋,鄭力孟,呂俊杰.  化學(xué)研究. 2018(05)
[2]巰基檢測方法研究進展[J]. 張力文,尚中博,常志顯,祁志沖,李德亮.  河南大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2018(04)
[3]狂犬病流行病學(xué)研究進展[J]. 尹景峰.  現(xiàn)代農(nóng)業(yè). 2017(11)
[4]狂犬病的危害及其防控策略的研究進展[J]. 鮑建光.  中國醫(yī)藥指南. 2017(06)
[5]狂犬病病毒糖蛋白生物學(xué)功能研究進展[J]. 汪孟航,朱洪偉,何民輝,溫永俊,程世鵬.  中國畜牧獸醫(yī). 2016(12)
[6]狂犬病流行與防治研究進展[J]. 毛偉成,藍榮偉,蒙南新,虞海芬.  醫(yī)學(xué)動物防制. 2015(03)
[7]蛋白質(zhì)巰基亞硝基化分子機制及其疾病相關(guān)性[J]. 石婷,陳銘,陳雄平,汪汲濤,萬錒俊,趙一雷.  化學(xué)進展. 2015(05)
[8]小分子生物硫醇熒光探針研究進展[J]. 王勝清,申世立,張延如,戴溪,趙寶祥.  有機化學(xué). 2014(09)
[9]蛋白質(zhì)棕櫚�；揎椀姆治龇椒ㄟM展[J]. 方彩云,張曉勤,陸豪杰.  分析化學(xué). 2014(04)
[10]巰基功能化沸石吸附Hg2+特征及固化/穩(wěn)定化含汞廢物研究[J]. 張新艷,王起超,張少慶,孫曉靜,張仲勝.  環(huán)境科學(xué)學(xué)報. 2009(10)

博士論文
[1]狂犬病毒強弱毒株差異性激活星狀膠質(zhì)細胞天然免疫通路的機制研究[D]. 田斌.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[2]狂犬病的探索治療以及相關(guān)病毒在神經(jīng)科學(xué)中的應(yīng)用[D]. 李亮.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[3]狂犬病毒先導(dǎo)RNA及其宿主互作蛋白的功能研究[D]. 張冉.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[4]中國動物狂犬病流行病學(xué)研究[D]. 馮燁.中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 2015
[5]狂犬病毒感染的神經(jīng)細胞差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究及伴侶素CCTγ的功能分析[D]. 張金陽.浙江大學(xué) 2012

碩士論文
[1]基于�；�-生物素交換的棕櫚�；揎椀鞍踪|(zhì)組分析方法學(xué)研究[D]. 程煒.吉林大學(xué) 2019
[2]基于高速離心和去污劑抽提的膜蛋白樣品制備方法的建立與優(yōu)化[D]. 周艷婷.華東理工大學(xué) 2018
[3]載脂蛋白B mRNA編輯酶催化多肽3A（APOBEC3A）的克隆表達及其生物學(xué)功能研究[D]. 成珊.第四軍醫(yī)大學(xué) 2017
[4]有機小分子熒光探針的合成及性能研究[D]. 劉曉東.蘇州大學(xué) 2014
[5]谷胱甘肽抗氧化系統(tǒng)在早期糖尿病腎病中的變化[D]. 包蓓艷.浙江大學(xué) 2002



本文編號：3565171