蛋白質(zhì)的S-棕櫚�；揎検且环N重要的翻譯后修飾,其動(dòng)態(tài)性和唯一的可逆性賦予了蛋白豐富的生理功能。棕櫚酰化修飾對(duì)于病毒侵染宿主細(xì)胞具有重要作用,它是通過(guò)影響病毒蛋白在細(xì)胞膜上的定位和聚集來(lái)影響宿主細(xì)胞的感染過(guò)程,這在甲型流感病毒中已有研究。棕櫚酰化修飾蛋白主要分布在腦組織中,能夠調(diào)節(jié)神經(jīng)元蛋白的功能,其含量的異常與神經(jīng)系統(tǒng)疾病密切相關(guān)。而狂犬病作為一種人獸共患惡性傳染病,有80%的病例為腦性狂犬病,在體內(nèi)顯示出強(qiáng)神經(jīng)噬性,研究狂犬病小鼠腦組織中的棕櫚酰化修飾蛋白,對(duì)理解狂犬病病毒感染過(guò)程具有重要意義。目前,對(duì)棕櫚酰化修飾蛋白的研究主要依賴于�；�-生物素交換法（Acyl-Biotin Exchange,ABE）,該方法通過(guò)羥胺（HA）切割目的蛋白從而暴露出新的巰基位點(diǎn),將帶有生物素的巰基反應(yīng)試劑與巰基進(jìn)行反應(yīng),最后利用鏈霉親和素瓊脂糖凝珠對(duì)生物素化蛋白進(jìn)行純化富集,實(shí)現(xiàn)棕櫚酰化修飾蛋白的檢測(cè)。但該方法假陽(yáng)性率高,且修飾位點(diǎn)定位不準(zhǔn)確,這些缺點(diǎn)極大限制了棕櫚酰化修飾蛋白的研究與應(yīng)用。本論文對(duì)傳統(tǒng)ABE方法進(jìn)行改進(jìn),建立了一種可靠性較高的棕櫚酰化修飾蛋白分析方法,并成功應(yīng)用于狂犬病小鼠模型中。... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

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TCEP前處理對(duì)ABE反應(yīng)的影響

第2章棕櫚�；鞍追治龇椒ǖ慕⑴c應(yīng)用18圖2.2TCEP前處理對(duì)ABE反應(yīng)的影響2.3.3瓊脂糖凝珠富集實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)將經(jīng)過(guò)ABE反應(yīng)的蛋白留取少部分樣本記作Input，剩余大部分樣本與鏈霉親和素瓊脂糖凝珠進(jìn)行特異性結(jié)合，室溫翻轉(zhuǎn)2h，500g離心5min，收集離心后的上清記作Super，將洗脫后的蛋白樣本記作Pull。分別將Input、Super、Pull三組的+HA樣本和-HA樣本進(jìn)行Western反應(yīng)。結(jié)果如圖2.3所示，Super組出現(xiàn)了較為明顯的條帶信號(hào)，表明部分蛋白沒(méi)有被瓊脂糖凝珠結(jié)合而是保留在上清中。同時(shí)，Pull組沒(méi)有出現(xiàn)信號(hào)條帶，證明經(jīng)富集切割后的樣品不能被Western-Biotin檢測(cè)，與理論相符合。傳統(tǒng)方法不能實(shí)現(xiàn)對(duì)富集蛋白在質(zhì)譜測(cè)試前的及時(shí)監(jiān)控，需要開(kāi)發(fā)新的檢測(cè)手段以保障質(zhì)譜檢測(cè)的高效性。圖2.3富集蛋白瓊脂糖凝珠的檢測(cè)圖2.4傳統(tǒng)法[70]與煮沸法流程圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]基于�；�-生物素交換的棕櫚酰化修飾蛋白質(zhì)組分析方法學(xué)研究[D]. 程煒.吉林大學(xué) 2019
[2]基于高速離心和去污劑抽提的膜蛋白樣品制備方法的建立與優(yōu)化[D]. 周艷婷.華東理工大學(xué) 2018
[3]載脂蛋白B mRNA編輯酶催化多肽3A（APOBEC3A）的克隆表達(dá)及其生物學(xué)功能研究[D]. 成珊.第四軍醫(yī)大學(xué) 2017
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