本文關(guān)鍵詞：脂多糖促進小鼠抗結(jié)核免疫功能的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景:結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)是引起結(jié)核病發(fā)病的病原菌。已有研究表明[1],機體感染M.tb后,M.tb可隱藏于宿主巨噬細胞內(nèi),通過抑制巨噬細胞抗M.tb自噬,逃逸免疫殺傷,造成潛伏感染�，F(xiàn)已有多種研究證明,清除胞內(nèi)菌感染主要依靠于固有免疫和誘導(dǎo)保護性細胞免疫。一般認(rèn)為巨噬細胞和淋巴細胞在抗結(jié)核感染免疫中起重要作用。本實驗室前期從細胞水平研究發(fā)現(xiàn):LPS能通過上調(diào)TLR4的表達水平,以及ROS產(chǎn)量上升從而促進巨噬細胞對M.tb的氧依賴性的殺傷,IFN-γ可以促進巨噬細胞對病原體的自噬。因此本研究從動物模型水平進一步研究非M.tb來源的TLR4受體激動劑LPS對小鼠單核-巨噬細胞抗結(jié)核桿菌免疫功能的調(diào)控作用。目的:研究LPS對感染結(jié)核桿菌小鼠單核-巨噬細胞抗結(jié)核桿菌免疫功能的調(diào)控作用。方法:1.取M.tb(H37Ra)在蘇通氏液體培養(yǎng)基中,培養(yǎng)箱培養(yǎng)1個月后轉(zhuǎn)種于7H11固體培養(yǎng)基中,37°C恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)1個月,使用無菌接種環(huán)收取M.tb菌種于1 ml勻漿器中,加入Tween-80反復(fù)研磨,取細菌懸液,用Tween-80經(jīng)10000 rpm×2 min洗滌3次,抗酸染色陽性且鏡下觀察細菌分散。使用分光光度儀檢測菌液濃度,并用生理鹽水稀釋成濃度為2×108CFU/mL的M.tb懸液,放入4°C冰箱備用。2.調(diào)整M.tb減毒株H37Ra活菌量的濃度為(2×108CFU/ml)尾靜脈打入C57BL/6小鼠體內(nèi),分別于7天、14天、21天處死小鼠,取肺、脾組織做病理切片和研磨培養(yǎng),同時稱取肺脾重量,檢測臟器重量指數(shù),確定M.tb是否成功感染小鼠。3.根據(jù)LPS試劑說明LPS致小鼠發(fā)熱劑量為500ng/kg,故將LPS劑量設(shè)為250ng/kg、500ng/kg、750ng/kg,尾靜脈打入C57BL/6小鼠體內(nèi),10h后脫頸處死做病理切片,以明確LPS在小鼠體內(nèi)的安全使用劑量。4.分組給藥7天、14天、21天后摘眼球取血后外周抗凝血,流式細胞術(shù)檢測lps對各組外周血中單核細胞表面tlr4表達水平、胞內(nèi)ros產(chǎn)量的促進作用。5.分組給藥7天、14天、21天后取小鼠外周抗凝血,進行細胞內(nèi)染色,流式細胞儀檢測表達ifn-γ和il-4t細胞亞群比例。6.分別于用藥后7天、14天、21天無菌分離小鼠肺、脾臟,石蠟切片后行he染色,鏡下觀察m.tb感染的小鼠肺、脾組織損傷情況。7.分別于用藥后7天、14天、21天無菌分離小鼠肺、脾臟,置于平皿內(nèi)200目不銹鋼篩網(wǎng)上研磨,pbs-吐溫80稀釋研磨,并稀釋接種于7h11培養(yǎng)皿上,37℃恒溫培養(yǎng)21d,鏡下觀察是否有結(jié)核菌生長。結(jié)果:1.不同濃度lps尾靜脈注射給藥后,病理結(jié)果顯示lps在小鼠體內(nèi)不引起明顯炎癥和組織損傷的最大安全劑量為250ng/kg。2.臟器重量指數(shù)、病理結(jié)果以及組織培養(yǎng)結(jié)果顯示結(jié)核桿菌減毒株h37ra2×108cfu/ml,尾靜脈注射14天后,可成功感染小鼠。減毒結(jié)核分枝桿菌h37ra經(jīng)尾靜脈注射感染小鼠模型可造成部分結(jié)核病樣病理性損傷。3.感染m.tb的小鼠,在lps給藥7天開始,外周血單核細胞中tlr4的表達水平(80.00±37.97)%,明顯高于未給藥組(15.66±10.14)%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.01)。說明lps可增強小鼠體內(nèi)被m.tb抑制的單核-巨噬細胞表面tlr4受體的表達率。4.感染m.tb的小鼠,在lps給藥14天后外周血單核細胞中ros產(chǎn)量(104.76±18.65)明顯高于未給藥組(55.70±3.43)(p0.01)。說明lps可增強小鼠體內(nèi)被m.tb抑制的單核細胞表面ros的產(chǎn)量,其中7天表達量最大后逐漸下降。5.感染m.tb小鼠,在lps給藥14天后外周血中表達ifn-γ的t細胞比例(11.52±1.43)%明顯高于未給藥組(3.84±1.11)%(p0.01);給藥7天后,外周血中表達il-4的t細胞比例(2.67±0.14)%即開始顯著低于未給藥組(4.78±1.14)%(P0.01),下降明顯增大。6.組織培養(yǎng)和病理結(jié)果皆可以證明LPS對M.tb感染的小鼠肺、脾組織損傷的逆轉(zhuǎn)作用。結(jié)論:1.低濃度LPS可在不引起炎癥損傷條件下,上調(diào)結(jié)核桿菌感染小鼠抗結(jié)核免疫功能。2.低濃度LPS可有效減輕M.tb感染小鼠的組織損傷。
【關(guān)鍵詞】：BALB/C小鼠 結(jié)核分枝桿菌 磷酸酯多糖 Toll樣受體 活性氧 細胞因子
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R52
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• Abstract8-11
• 前言11-14
• 材料與方法14-22
• 結(jié)果22-42
• 討論42-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻45-49
• 致謝49-50
• 附錄50-63
• 附錄A 英文縮略詞表50-51
• 附錄B 常用試劑配制51-54
• 附錄C 個人簡歷及發(fā)表論文54-55
• 附錄D 綜述55-63
• 參考文獻61-63

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張立興;中國結(jié)核病控制工作面臨的挑戰(zhàn)[J];中華流行病學(xué)雜志;2004年08期

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本文編號：356284