研究背景和目的:乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）感染是導(dǎo)致慢性肝炎、肝纖維化、肝硬化以及肝細(xì)胞癌的主要因素,而肝星狀細(xì)胞（Hepatic stellate cell,HSC）是啟動(dòng)這些肝臟疾病的是主要效應(yīng)細(xì)胞之一。但是,關(guān)于HBV對(duì)肝星狀細(xì)胞的直接調(diào)節(jié)作用的研究相對(duì)較少。因此,為了更好的了解HBV感染后導(dǎo)致的肝臟疾病發(fā)生以及免疫耐受形成的原因,探究HBV對(duì)肝星狀細(xì)胞的影響是十分必要的。此外,單核/巨噬細(xì)胞作為肝臟內(nèi)一類主要的固有免疫細(xì)胞,在抵御疾病和調(diào)節(jié)肝臟免疫方面具有重要作用。但是HBV作用下的肝星狀細(xì)胞與單核/巨噬細(xì)胞之間發(fā)生的相互作用機(jī)制需要進(jìn)一步研究。因此,探究HBV作用于肝星狀細(xì)胞后對(duì)單核細(xì)胞的影響,對(duì)HBV感染后導(dǎo)致的免疫抑制以及肝臟纖維化的發(fā)生具有重要意義。方法:為了探究HBV對(duì)肝星狀細(xì)胞的影響,我們?cè)谂囵B(yǎng)肝星狀細(xì)胞時(shí)加入具有感染活力的HBVcc,通過免疫熒光技術(shù)來檢測(cè)肝星狀細(xì)胞中HBV感染情況。在HBVcc和HBs Ag作用下,通過q PCR技術(shù)檢測(cè)肝星狀細(xì)胞纖維化分子及細(xì)胞因子的基因表達(dá)水平。HBV與肝星狀細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生的條件培養(yǎng)基作用于單核細(xì)... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

HBV病毒結(jié)構(gòu)的介紹[4]

第1章緒論3維化因子。此外，HSC活化后細(xì)胞的吞噬能力、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、氧化應(yīng)激、視黃醇和膽固醇代謝以及表觀遺傳學(xué)等都發(fā)生復(fù)雜的變化[16]。HSC的激活是肝纖維化形成過程的關(guān)鍵事件，同時(shí)HSC在肝損傷和修復(fù)過程中的作用是了解肝纖維化的一個(gè)重要特征[17,18]。肝臟纖維化擾亂了肝臟的正常結(jié)構(gòu)和功能，尤其是在肝硬化的末期，因此，肝纖維化也被認(rèn)為是一種癌前狀態(tài)，它為原發(fā)性腫瘤的發(fā)展提供了適合的微環(huán)境。圖1.2肝內(nèi)細(xì)胞調(diào)節(jié)HSC的示意圖[15]HSC活化除了誘導(dǎo)ECM表達(dá)引起肝纖維化之外，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)活化的HSC表達(dá)各種細(xì)胞因子及受體，包括PDGF、TGF-β、MCP1、RANTES、IL-8、MIP-2、CXCL12等[19-21]。這些細(xì)胞因子是HSC與肝內(nèi)細(xì)胞之間的交流的重要介質(zhì)。因此，研究HSC產(chǎn)生的細(xì)胞因子的生物學(xué)功能可以更加清楚的了解HSC對(duì)肝內(nèi)細(xì)胞之間的作用，同時(shí)為更好的治療肝臟疾病提供理論背景。1.2.2HBV對(duì)肝星狀細(xì)胞的影響慢性HBV感染是導(dǎo)致肝纖維化的主要原因，最終發(fā)展為肝硬化和肝細(xì)胞癌，這可能是因?yàn)镠BV或病毒蛋白與HSC直接或間接相互作用導(dǎo)致的。雖然有幾篇文獻(xiàn)研究報(bào)道了HBV可直接激活HSC，但是實(shí)驗(yàn)結(jié)果不明顯，存在很多疑問，對(duì)于具體的作用機(jī)制更是沒有提及。目前大多研究表明，HBV主要通過間接作用的方式借助肝內(nèi)其他細(xì)胞調(diào)節(jié)HSC的功能。最近發(fā)現(xiàn)HBx蛋白可能與HBV相關(guān)的纖維化進(jìn)展有關(guān)。HBx是一種多功能調(diào)節(jié)劑，通過與宿主細(xì)胞直接或間接作用，調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞周期進(jìn)展、蛋白降解途徑、細(xì)胞凋亡等細(xì)胞活動(dòng)。此外，HBx通過與細(xì)胞之間的相互作用參與多種胞質(zhì)信號(hào)通路，包括PKC、MAPK以及JNK等信號(hào)通路的活化[22]。此外，HBx也可通過間接的方式調(diào)節(jié)HSC的功

第1章緒論6進(jìn)一步的體外實(shí)驗(yàn)表明[45]，HBsAg和HBV通過TLR2/MyD88/NF-κB信號(hào)通路誘導(dǎo)單核細(xì)胞PD-L1、HLA-E及免疫調(diào)節(jié)因子表達(dá)[46]。由此推測(cè)，HBV誘導(dǎo)的抑制性單核/巨噬細(xì)胞對(duì)HBV的持續(xù)感染以及肝臟纖維化的發(fā)生可能具有重要作用。此外，急性HBV感染患者體內(nèi)HBsAg水平和MDSC數(shù)量均低于慢性HBV感染者，同時(shí)MDSC的比例與HBsAg的含量具有正相關(guān)的趨勢(shì)，體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)HBsAg可誘導(dǎo)單核細(xì)胞分化為MDSC，這是導(dǎo)致肝臟免疫抑制的一個(gè)重要原因[47,48]。1.4肝星狀細(xì)胞與單核/巨噬細(xì)胞1.4.1肝星狀細(xì)胞對(duì)單核/巨噬細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用大量的研究探索了HSC在肝纖維化和肝臟修復(fù)中的重要性。HSC除了在肝纖維化中的作用外，HSC與肝內(nèi)細(xì)胞之間的相互作用對(duì)肝臟的免疫調(diào)節(jié)具有重要作用，尤其是HSC與免疫細(xì)胞之間的雙向調(diào)節(jié)是維持正常肝功能和抵御疾病所必需的基礎(chǔ)[49]。圖1.3HSC的免疫調(diào)節(jié)作用示意圖[50]研究表明HSC表達(dá)多種受體和可溶性效應(yīng)分子，這使它們能夠與不同的免疫細(xì)胞亞群相互作用。肝損傷時(shí)，HSC通過表達(dá)細(xì)胞因子（MCP-1、CCL21、RANTES和MIP-2等）誘導(dǎo)單核細(xì)胞向肝臟浸潤(rùn)[51]。活化的HSCs誘導(dǎo)外周單核細(xì)胞以及肝內(nèi)單核細(xì)胞分化成為可分泌IL-10和TGF-β的具有免疫調(diào)節(jié)作用的巨噬細(xì)胞[52,53]。HSC促進(jìn)骨髓來源的免疫抑制性細(xì)胞（MDSC）的積累，尤其是Mo-MDSC[54]。HSC通過COX2-PGE2-EP4信號(hào)傳導(dǎo)促進(jìn)MDSC分化，使用COX-2抑制劑降低PEG2的產(chǎn)生可顯著減少M(fèi)DSC的積累，而且活化的HSC誘

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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