研究背景和目的:乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）感染是導(dǎo)致慢性肝炎、肝纖維化、肝硬化以及肝細胞癌的主要因素,而肝星狀細胞（Hepatic stellate cell,HSC）是啟動這些肝臟疾病的是主要效應(yīng)細胞之一。但是,關(guān)于HBV對肝星狀細胞的直接調(diào)節(jié)作用的研究相對較少。因此,為了更好的了解HBV感染后導(dǎo)致的肝臟疾病發(fā)生以及免疫耐受形成的原因,探究HBV對肝星狀細胞的影響是十分必要的。此外,單核/巨噬細胞作為肝臟內(nèi)一類主要的固有免疫細胞,在抵御疾病和調(diào)節(jié)肝臟免疫方面具有重要作用。但是HBV作用下的肝星狀細胞與單核/巨噬細胞之間發(fā)生的相互作用機制需要進一步研究。因此,探究HBV作用于肝星狀細胞后對單核細胞的影響,對HBV感染后導(dǎo)致的免疫抑制以及肝臟纖維化的發(fā)生具有重要意義。方法:為了探究HBV對肝星狀細胞的影響,我們在培養(yǎng)肝星狀細胞時加入具有感染活力的HBVcc,通過免疫熒光技術(shù)來檢測肝星狀細胞中HBV感染情況。在HBVcc和HBs Ag作用下,通過q PCR技術(shù)檢測肝星狀細胞纖維化分子及細胞因子的基因表達水平。HBV與肝星狀細胞培養(yǎng)產(chǎn)生的條件培養(yǎng)基作用于單核細... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

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HBV病毒結(jié)構(gòu)的介紹[4]

第1章緒論3維化因子。此外，HSC活化后細胞的吞噬能力、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、氧化應(yīng)激、視黃醇和膽固醇代謝以及表觀遺傳學(xué)等都發(fā)生復(fù)雜的變化[16]。HSC的激活是肝纖維化形成過程的關(guān)鍵事件，同時HSC在肝損傷和修復(fù)過程中的作用是了解肝纖維化的一個重要特征[17,18]。肝臟纖維化擾亂了肝臟的正常結(jié)構(gòu)和功能，尤其是在肝硬化的末期，因此，肝纖維化也被認為是一種癌前狀態(tài)，它為原發(fā)性腫瘤的發(fā)展提供了適合的微環(huán)境。圖1.2肝內(nèi)細胞調(diào)節(jié)HSC的示意圖[15]HSC活化除了誘導(dǎo)ECM表達引起肝纖維化之外，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)活化的HSC表達各種細胞因子及受體，包括PDGF、TGF-β、MCP1、RANTES、IL-8、MIP-2、CXCL12等[19-21]。這些細胞因子是HSC與肝內(nèi)細胞之間的交流的重要介質(zhì)。因此，研究HSC產(chǎn)生的細胞因子的生物學(xué)功能可以更加清楚的了解HSC對肝內(nèi)細胞之間的作用，同時為更好的治療肝臟疾病提供理論背景。1.2.2HBV對肝星狀細胞的影響慢性HBV感染是導(dǎo)致肝纖維化的主要原因，最終發(fā)展為肝硬化和肝細胞癌，這可能是因為HBV或病毒蛋白與HSC直接或間接相互作用導(dǎo)致的。雖然有幾篇文獻研究報道了HBV可直接激活HSC，但是實驗結(jié)果不明顯，存在很多疑問，對于具體的作用機制更是沒有提及。目前大多研究表明，HBV主要通過間接作用的方式借助肝內(nèi)其他細胞調(diào)節(jié)HSC的功能。最近發(fā)現(xiàn)HBx蛋白可能與HBV相關(guān)的纖維化進展有關(guān)。HBx是一種多功能調(diào)節(jié)劑，通過與宿主細胞直接或間接作用，調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄、細胞周期進展、蛋白降解途徑、細胞凋亡等細胞活動。此外，HBx通過與細胞之間的相互作用參與多種胞質(zhì)信號通路，包括PKC、MAPK以及JNK等信號通路的活化[22]。此外，HBx也可通過間接的方式調(diào)節(jié)HSC的功

第1章緒論6進一步的體外實驗表明[45]，HBsAg和HBV通過TLR2/MyD88/NF-κB信號通路誘導(dǎo)單核細胞PD-L1、HLA-E及免疫調(diào)節(jié)因子表達[46]。由此推測，HBV誘導(dǎo)的抑制性單核/巨噬細胞對HBV的持續(xù)感染以及肝臟纖維化的發(fā)生可能具有重要作用。此外，急性HBV感染患者體內(nèi)HBsAg水平和MDSC數(shù)量均低于慢性HBV感染者，同時MDSC的比例與HBsAg的含量具有正相關(guān)的趨勢，體外實驗證實HBsAg可誘導(dǎo)單核細胞分化為MDSC，這是導(dǎo)致肝臟免疫抑制的一個重要原因[47,48]。1.4肝星狀細胞與單核/巨噬細胞1.4.1肝星狀細胞對單核/巨噬細胞的調(diào)節(jié)作用大量的研究探索了HSC在肝纖維化和肝臟修復(fù)中的重要性。HSC除了在肝纖維化中的作用外，HSC與肝內(nèi)細胞之間的相互作用對肝臟的免疫調(diào)節(jié)具有重要作用，尤其是HSC與免疫細胞之間的雙向調(diào)節(jié)是維持正常肝功能和抵御疾病所必需的基礎(chǔ)[49]。圖1.3HSC的免疫調(diào)節(jié)作用示意圖[50]研究表明HSC表達多種受體和可溶性效應(yīng)分子，這使它們能夠與不同的免疫細胞亞群相互作用。肝損傷時，HSC通過表達細胞因子（MCP-1、CCL21、RANTES和MIP-2等）誘導(dǎo)單核細胞向肝臟浸潤[51]�；罨腍SCs誘導(dǎo)外周單核細胞以及肝內(nèi)單核細胞分化成為可分泌IL-10和TGF-β的具有免疫調(diào)節(jié)作用的巨噬細胞[52,53]。HSC促進骨髓來源的免疫抑制性細胞（MDSC）的積累，尤其是Mo-MDSC[54]。HSC通過COX2-PGE2-EP4信號傳導(dǎo)促進MDSC分化，使用COX-2抑制劑降低PEG2的產(chǎn)生可顯著減少MDSC的積累，而且活化的HSC誘

【參考文獻】：
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