目的分析小鼠樹突狀細(xì)胞（DC2.4）感染弓形蟲后所分泌的外泌體及其富集的小RNA與piRNA的變化,為外泌體在弓形蟲-宿主互作中的作用提供必要的信息。方法 DC2.4細(xì)胞分為2組（未感染組與感染組）,用含無外泌體血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)。待細(xì)胞長滿,感染組用弓形蟲RH株速殖子感染28 h,未感染組則培養(yǎng)28 h。收集兩組細(xì)胞的培養(yǎng)上請,采用超速離心法分別提取外泌體,通過透射電鏡檢測外泌體形態(tài),并用納米顆粒追蹤儀檢測外泌體的粒徑大小以及顆粒密度。對外泌體進(jìn)行小RNA高通量測序分析,用生物信息學(xué)方法分析感染組與對照組差異顯著的piRNA,對并其靶基因及功能進(jìn)行預(yù)測。結(jié)果對弓形蟲感染與未感染的DC2.4細(xì)胞分泌的外泌體進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定以及粒徑大小和密度的比較,發(fā)現(xiàn)弓形蟲感染會導(dǎo)致DC2.4分泌的外泌體密度增加;而通過外泌體小RNA測序,發(fā)現(xiàn)弓形蟲感染會導(dǎo)致外泌體中miRNA及piRNA數(shù)目增加,其中感染后顯著升高的piRNA包括piR-mmu-159、piR-mmu-1526、piR-mmu-9082、piR-mmu-17405、和piR-mmu-25576。對上述piRNA靶基因的預(yù)測和KEGG分析... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2020,40(05)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

外泌體形態(tài)學(xué)鑒定圖

宿主細(xì)胞感染弓形蟲28 h后，弓形蟲在宿主細(xì)胞內(nèi)大量增殖，并且大量的弓形蟲物質(zhì)分泌到宿主細(xì)胞內(nèi)，參與宿主細(xì)胞的調(diào)控，因而此階段對弓形蟲感染致病過程十分重要[23]。我們用弓形蟲感染DC2.4細(xì)胞28 h后，對感染與未感染弓形蟲的DC2.4細(xì)胞進(jìn)行外泌體提取，通過透射電鏡的形態(tài)學(xué)鑒定，我們發(fā)現(xiàn)DC2.4細(xì)胞分泌的外泌體的形態(tài)與弓形蟲感染無太大關(guān)聯(lián)。而經(jīng)過納米顆粒追蹤鑒定，我們發(fā)現(xiàn)由于弓形蟲的感染，會導(dǎo)致DC2.4細(xì)胞分泌的外泌體在同樣提取的條件下密度升高。在對外泌體的小RNA進(jìn)行高通量測序后，我們發(fā)現(xiàn)感染組的外泌體富集的小RNA數(shù)比未感染組高，這表明弓形蟲感染可能通過外泌體途徑將自身的一些小RNA分泌出細(xì)胞，或者是由于弓形蟲的感染導(dǎo)致DC2.4細(xì)胞外泌體富集的小RNA組發(fā)生變化的結(jié)果。圖3 KDA分析結(jié)果圖

KDA分析結(jié)果圖


本文編號：3511349