【背景與目的】流行病學(xué)研究表明慢性HBV感染是肝細胞癌的重要病因。中國是肝炎大國,探索HBV感染影響肝癌發(fā)生發(fā)展的機制對預(yù)防和治療HBV感染相關(guān)的肝癌具有重要意義。近年來研究報道m(xù)iRNA的異常表達與腫瘤關(guān)系密切。課題組前期發(fā)現(xiàn)HBV可引起miR-181a/362/382/19a在肝癌細胞和組織中表達上調(diào),HSPA5和HSPA2可能是其潛在靶基因。HSPA5是位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的一種重要分子伴侶,在應(yīng)激狀態(tài)下表達升高以維持內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)定和保護細胞免受凋亡。HSPA2也屬于HSP70家族,與HSP70的氨基酸有84%的同源性,但目前研究較少。前期研究發(fā)現(xiàn)HSPA5/HSPA2在肝癌中的表達明顯高于癌旁組織,但在體外穩(wěn)定表達HBV的Hep G2.215細胞系中其表達低于Hep G2細胞系。因此HBV上調(diào)miR-181a/362/382/19a影響肝癌發(fā)生發(fā)展的機制以及HSPA5/HSPA2在體內(nèi)肝癌組織與體外細胞模型表達差異的原因和意義均有待進一步探索。我們推測HBV感染可能影響多種miRNA的表達,這些miRNA調(diào)控多個靶基因的表達,進而影響多條信號通路,共同影響肝癌的發(fā)生發(fā)展。進一步篩選出miR-... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

miR-382-5p/19a-3p靶向HSPA2的熒光素酶報告基因分析

科 技 大 學(xué) 博 士 學(xué) 位 論 文織標(biāo)本中 PTEN 的表達化學(xué)的方法檢測臨床肝癌組織標(biāo)本中 PTEN 的蛋否將肝癌組織（Ca）和癌旁組織（CaP）分為 HB、HBV 未感染的肝癌組織[HBV(-)Ca]組、HBV 和 HBV 未感染的癌旁組織[HBV(-)CaP]組，比較異。從圖 5 結(jié)果可見在 HBV(+)Ca 組中 PTEN 的(+)CaP 組中 PTEN 的表達明顯低于 HBV(-)CaP 組織以及癌旁組織中 PTEN 的表達明顯降低，在 HBV 感染的肝細胞癌變中起重要作用。

華 中 科 技 大 學(xué) 博 士 學(xué) 位 論 文(WT)和突變型(MUT)。將上述質(zhì)粒分別與miR-181a/362的mimic共轉(zhuǎn)染HepG2細胞，培養(yǎng)24h后檢測細胞螢火蟲熒光素酶強度和海腎熒光素酶強度，計算相對熒光強度并分析其差異。從圖6B中可見，miR-181a的mimic和GV272-PTE(miR-181a) 野生型(WT)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HepG2細胞的相對熒光強度明顯低于其和GV272-PTEN (miR-181a) 突 變 型 (MUT) 質(zhì) 粒 共 轉(zhuǎn) 染 ， miR-362 的 mimic 與GV272-PTEN (miR-362-3p) 野 生 型 (WT) 質(zhì) 粒 共 轉(zhuǎn) 時 也 顯 著 低 于 其 和GV272-PTEN (miR-362-3p) 突 變 型 (MUT) 質(zhì) 粒 共 轉(zhuǎn) 。 以 上 實 驗 結(jié) 果 說 明miR-181a/362-3p可分別直接靶向結(jié)合PTEN的3’UTR，PTEN是miR-181a/362的靶基因。


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