【背景】沙眼衣原體（Chlamydia trachomatis,C.t）泌尿生殖道感染是近年來國(guó)內(nèi)外最常見的性傳播疾病,大約2/3的C.t感染者沒有癥狀,但感染可持續(xù)存在并引起一系列嚴(yán)重的并發(fā)癥,例如:女性的盆腔炎、異位妊娠和輸卵管性不孕,男性的尿道炎、附睪炎等。癥狀的隱匿性更增加了感染在人群中傳播的機(jī)率。由于C.t特殊的生物學(xué)特性,抗生素的治療效果并不令人滿意,迄今為止尚無具有有效免疫保護(hù)作用的疫苗。C.t是國(guó)際公認(rèn)的威脅人類公共健康的難題�？股乜蓴_亂人體內(nèi)正常菌群并造成耐藥菌群的傳播,針對(duì)特定致病菌而不影響其它菌群的精準(zhǔn)的生物治療是目前國(guó)際追求的最理想的目標(biāo),但迄今為止尚無。嚴(yán)峻的微生物耐藥形勢(shì)促使我們探索和建立新的有效的研發(fā)機(jī)制和具體方法,或許可以在一定程度上可以為未滿足的臨床需要提供有價(jià)值的治療選擇。我們前期發(fā)現(xiàn)Chlamydia virus CPG1衣殼蛋白Vp1對(duì)沙眼衣原體有明顯的抑制/破壞效應(yīng),抑制率可達(dá)65%-92%,該效應(yīng)已在沙眼衣原體小鼠生殖道感染模型中得到驗(yàn)證,并且該蛋白對(duì)其他生殖道常見菌沒有抑制作用。這可能是噬菌體對(duì)其相應(yīng)宿主產(chǎn)生抑制/破壞作用的新機(jī)制。【目的... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：105 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

噬菌體發(fā)現(xiàn)之后100年內(nèi)的大事件（參考自：SalmondGPandFineranPC,NatRevMicrobiol.2015）

1.加入與一抗對(duì)應(yīng)的二抗稀釋液，同時(shí)加入 hoechst 稀釋液染細(xì)胞核。37℃孵h。2.加入 PBS 溶液洗 3 次，每次 5 min，水平振蕩器上面振蕩。3.將玻片小心夾起，用去離子水洗一下，用吸水紙將玻片上面的水小心吸干意不要碰到細(xì)胞。4.滴少許封片劑在載玻片上，將玻片的細(xì)胞面朝下，蓋在封片劑上面。5.熒光顯微鏡觀察并拍照。若不直接觀察，可將樣本放于 4 ℃冰箱保存。1.2 結(jié)果.2.1 Vp1 蛋白的表達(dá)與純化轉(zhuǎn)化 E.coli BL-21 后的 Vp1/Pet30a(+)重組質(zhì)粒，經(jīng) IPTG 大量誘導(dǎo)表達(dá) H簽標(biāo)記的 Vp1 蛋白，經(jīng) SDS-PAGE 檢測(cè)，考馬斯亮蘭染色后可觀察到在重粒蛋白沉淀中于相對(duì)分子量約 72 kDa 的位置有一明顯條帶（見圖 2A），即表達(dá)的 Vp1 蛋白。回收純化后的 Vp1 蛋白用 SDS-PAG 檢測(cè)，在相對(duì)分子 72 kDa 處有一條唯一的蛋白條帶（見圖 2 B）。

津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文 一、Vp1 對(duì)沙眼衣原體抑制作用的研白表達(dá)量很高。（B） 誘導(dǎo)表達(dá)的蛋白經(jīng)過柱純化后，SDS-PAGE 檢測(cè)，在分子量 70 kDa 附近有一條唯一的條帶。說明雜蛋白被移除，Vp1 被純化。.2.2 Vp1 蛋白的濃度測(cè)定采用 BCA 法測(cè)定純化后的 Vp1 蛋白的濃度（圖 3）。先根據(jù)各濃度標(biāo)準(zhǔn) 562 nm 處的吸光值繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線（見表 6）。測(cè)得待測(cè) Vp1 蛋白溶液在 5m 處的吸光度為 0.426，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線公式，計(jì)算出純化后 Vp1 蛋白的濃度48.2 μg/mL。表 6: 各濃度標(biāo)準(zhǔn)品在 562 nm 處的吸光值準(zhǔn)品濃度 2000 1500 1000 750 500 250 125 25 0OD 值 1.287 1.055 0.7 0.611 0.483 0.304 0.238 0.158 0.

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Biological Effects of Chlamydiaphage phi CPG1 Capsid Protein Vp1 on Chlamydia Trachomatis In Vitro and In Vivo[J]. 王生,郭睿,郭媛麗,邵麗麗,劉洋,魏世娟,劉原君,劉全忠.  Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2017(01)
[2]衣原體噬菌體phiCPG1衣殼蛋白Vp1的空間結(jié)構(gòu)分析及分段克隆表達(dá)[J]. 周全,劉原君,孫長(zhǎng)貴,郭媛麗,馬璟玥,鄭蕾,劉全忠.  中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志. 2016(05)
[3]衣原體噬菌體phiCPG1衣殼蛋白Vp1在D型沙眼衣原體外膜中結(jié)合位點(diǎn)的檢測(cè)[J]. 劉原君,孫毅娜,姚衛(wèi)鋒,李燕,李卓然,衛(wèi)酒榮,劉全忠.  中華傳染病雜志. 2012 (10)



本文編號(hào)：3498698