目的·研究血漿外泌體來源的microRNA（miRNA）,為結(jié)核病的診斷尋找潛在標(biāo)志物。方法·采用卡介苗（Bacille CalmetteGuérin,BCG,即減毒牛分枝結(jié)核桿菌）感染人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞（THP-1）來源的巨噬細(xì)胞（BCG組）,設(shè)置未感染細(xì)胞為對照組。利用超速離心法獲取2組細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的外泌體,通過透射電子顯微鏡（transmission electron microscope,TEM）、蛋白質(zhì)印跡法進(jìn)行形態(tài)學(xué)及蛋白標(biāo)志物鑒定,并對外泌體進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序分析。選取測序結(jié)果中的3個(gè)差異表達(dá)miRNAs,就10例結(jié)核病患者（結(jié)核病組）和8例健康志愿者（健康對照組）的血漿外泌體進(jìn)行臨床驗(yàn)證。通過TargetScan、miRDB和PicTar數(shù)據(jù)庫對存在潛在差異表達(dá)的miRNA進(jìn)行靶基因預(yù)測。結(jié)果·細(xì)胞培養(yǎng)上清液外泌體測序結(jié)果顯示,與對照組相比,miRNA-323a-3p、miRNA-29a-3p和miRNA-29b-3p在BCG組的表達(dá)均有顯著差異,而在臨床驗(yàn)證中僅有miRNA-323a-3p在2組表達(dá)間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.004）;且miRNA-323a-3... 

【文章來源】：上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2020,40(02)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

不同因素誘導(dǎo)的THP-1細(xì)胞形態(tài)（×40)

外泌體的TEM觀察

外泌體內(nèi)含有多種特異性蛋白，如CD81、CD63、CD9、TSG101等。本研究采用Western blotting對外泌體特異性蛋白CD9及TSG101進(jìn)行驗(yàn)證，以β-actin作為內(nèi)參。通過對超速離心法獲取的沉淀進(jìn)行檢測發(fā)現(xiàn)，外泌體特征性蛋白高表達(dá)，同時(shí)也進(jìn)一步說明所提取樣本為外泌體（圖3）。2.4 細(xì)胞培養(yǎng)上清液外泌體轉(zhuǎn)錄組測序分析


本文編號：3498289