目的:肺炎支原體是引起呼吸道感染的常見的病原菌,此外,它也是大多數(shù)社區(qū)獲得性肺炎患者的主要致病菌之一。由該致病菌導(dǎo)致的機體發(fā)病率在最近幾年顯著升高。在中國,肺炎支原體感染發(fā)生率超過15%,部分省份情況更為嚴重,高達20%-30%,極大影響了人們的生活質(zhì)量和生命健康。雖然目前肺炎支原體的診斷方法種類繁多,但是由于它感染機體后引起的臨床癥狀并不具有特征性,加之臨床上缺乏早期有效的診斷方法,因而發(fā)展一種快速、簡便、低成本的檢測方法對提高治愈率,減少過度使用抗生素和減輕病人的痛苦及其經(jīng)濟壓力起著至關(guān)重要的作用。本研究基于檢測物肺炎支原體的特異性DNA序列與G6-P熒光探針的特異性結(jié)合以及氧化石墨烯的熒光淬滅效應(yīng),從而實現(xiàn)肺炎支原體DNA的快速檢測。方法:本研究引入了一種標記熒光的探針鏈,該探針的5’端可以共聚生成G-四聯(lián)體,而3’末端連有FAM熒光素,并且靠近3’端的DNA序列可以和目標物肺炎支原體的DNA特異性結(jié)合。在沒有目標物肺炎支原體DNA存在的情況下,G-四聯(lián)體游離的單鏈DNA部分能夠被氧化石墨烯所吸附,幾乎所有的熒光被氧化石墨烯淬滅,當體系中加入肺炎支原體DNA后,DNA能夠和G-四... 

【文章來源】：海南醫(yī)學(xué)院海南省

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

G-四聯(lián)體/GO檢測微平臺的構(gòu)筑及其在肺炎支原體分子診斷中的研究

-G4 熒光探針形成示，條帶 1，2，3，4 分別為終濃度為 2.5 μM 的 G6-P 熒光探針，從圖中可以看出，G6-P，G5-P，G4-P 和一條低分子條帶，但是只有 G6-P，G5-P，G4-P 可以 G6-P，G5-P，G4-P 形成了 TP-G4 熒光探針結(jié)構(gòu)，而熒光探針結(jié)構(gòu)。此外，我們發(fā)現(xiàn)隨著 G 堿基數(shù)量的增明 TP-G4 熒光探針的形成效率也更高。光探針與目標物肺炎支原體 DNA 反應(yīng)，7，8 分別為終濃度為 2.5 μM 的 G6-P，G5-P，G4-P物質(zhì)的量的目標肺炎支原體 DNA 反應(yīng)結(jié)果，從圖中G6-P，G5-P，G4-P 均可以和目標肺炎支原體 DNA 反量的增加，聚合物條帶更亮，這也表明 TP-G4 熒光探從而結(jié)合效率也隨之增加。

色譜TP-G4 形成 基于不同的卷繞方向可以分為平行結(jié)構(gòu)和反平行結(jié)構(gòu)，D 光譜在 264 nm 處有正峰，在 240 nm 處為負峰，而反平 290nm 處有正峰，在 260nm 處為負峰。如圖 3-2 所示，G 處呈現(xiàn)陽性峰，這是單鏈 DNA 典型的 CD 譜特征。而 G 譜在 270 nm 處出現(xiàn)了陽性峰，在 240 nm 處出現(xiàn)了負峰行結(jié)構(gòu)的 TP-G4 的 CD 譜。但是當我們用 G4-P、G5-P、 G0-P 的 CD 譜時，可以分別得到一個 CD 譜：在 264 n處為負峰。該峰為典型的平行結(jié)構(gòu)的 TP-G4 的 CD 譜，由G6-P 形成了 TP-G4 熒光探針結(jié)構(gòu)，測的 CD 譜在 270 nm由于 3’端單鏈緣故，導(dǎo)致陽峰的位置出現(xiàn)了部分的向右


本文編號：3475032