發(fā)布時(shí)間：2021-11-03 11:10

　　目的:IFN-α為慢性乙型肝炎主要的抗病毒治療藥物之一,宿主或病毒的多種因素與其療效相關(guān)。目前,尚無促炎細(xì)胞因子IL-17是否可調(diào)節(jié)IFN-α抗HBV作用進(jìn)而影響IFN-α的臨床療效的相關(guān)報(bào)道。因此,本課題擬探討IL-17對IFN-α抗HBV作用的調(diào)節(jié)及機(jī)制,以期為闡釋CHB患者IFN-α療效不佳原因提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1.以轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-HBV1.3質(zhì)粒的HepG2（HepG2-HBV1.3）為細(xì)胞模型,用0 ng/ml、0.2 ng/ml、1 ng/ml、25 ng/ml、50 ng/ml、100ng/ml的IL-17預(yù)處理HepG2-HBV1.3細(xì)胞24h,再用1000 IU/mL IFN-α作用48h。用ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清HBsAg與HBeAg水平;western blot法檢測細(xì)胞內(nèi)HBsAg及HBcAg的蛋白表達(dá);qRT-PCR法檢測上清HBV-DNA及細(xì)胞內(nèi)HBsAg與HBcAg mRNA的表達(dá)水平,比較分析在不同濃度的IL-17作用下對IFN-α抗HBV效應(yīng)的影響;2.用50 ng/mlIL-17預(yù)處理細(xì)胞6h,12h,24h,48h,再用1000... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

HepG2-HBV1.3細(xì)胞在1000IU/mlIFN-α作用24、48、72h下的細(xì)胞增殖曲線(a:細(xì)胞存活率；b：細(xì)胞OD值)

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文處理 48h、72h 后細(xì)胞培養(yǎng)液上清 HBsAg 明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖 2a，P 值均<0.05）；IFN-α作用 48h、72h 細(xì)胞培養(yǎng)液上清 HBeAg OD 值分別為 0.37±0.01、0.24±0.06，對照組 48h、72h 細(xì)胞培養(yǎng)液上清 HBeAg OD 值分別為 0.66±0.06、0.49±0.09，兩組相比，IFN-α 處理 48h、72h 后細(xì)胞培養(yǎng)液上清 HBeAg 明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖 2b，P 值均<0.05）。

表達(dá)（a：HBsAg mRNA 相對表達(dá)量，b：HBsAg mRNA 相對表達(dá)量；*、**代表與對照組相比 P<0.05、P<0.01）Figure3. The expression of intracellular HBsAg and HBcAg mRNA after 1000 IU/ml IFN-αtreatment for 24, 48 and 72 hours（a. Relative expression of HBsAg mRNA, b.Relativeexpression of HBcAg mRNA, *,**compared with cell control group P<0.05,P<0.01）2.2 IL-17 作用 HepG2-HBV1.3 細(xì)胞后 HBV 抗原的表達(dá)分析2.2.1 IL-17 對 HepG2-HBV1.3 細(xì)胞增殖的影響我們用不同濃度（0、0.2 ng/ml、1 ng/ml、25 ng/ml、50 ng/ml、100ng/ml）的IL-17 處理 HepG2-HBV1.3 細(xì)胞 12h、24h、48h、72h，細(xì)胞存活率與對照組（0ng/ml）相比，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖 4a，P 值均>0.05）；我們檢測用不同濃度的 IL-17處理 HepG2-HBV1.3 細(xì)胞 12h、24h、48h、72h 后細(xì)胞 OD 值，與對照組相比，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖 4b，P 值均>0.05）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Pegylated interferon α-2b up-regulates specific CD8+ T cells in patients with chronic hepatitis B[J]. Ji Chen,Yan Wang,Xue-Jie Wu,Jun Li,Feng-Qin Hou,Gui-Qiang Wang,Department of Infectious Diseases,Center for Liver Diseases,Peking University First Hospital,Beijing 100034,China.  World Journal of Gastroenterology. 2010(48)
[2]Expression of ICAM-1, HLA-DR, and CD80 on peripheral circulating CD1αDCs induced in vivo by IFN-αin patients with chronic hepatitis B[J]. Yong-Sheng Yu, Zheng-Hao Tang, Jing-Chao Han, Min Xi, Jie Feng, Guo-Qing Zang, Department of Infectious Diseases, Sixth People’s Hospital of Shanghai Jiaotong University, Shanghai 200233, China.  World Journal of Gastroenterology. 2006(09)
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[4]1.3倍乙型肝炎病毒全基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及在HepG2細(xì)胞中的表達(dá)[J]. 唐霓,黃愛龍,張秉強(qiáng),閆歌,向明確,蒲丹,郭暉.  中華肝臟病雜志. 2003(08)



本文編號：3473577