發(fā)布時(shí)間：2021-10-23 11:47

　　為了探索發(fā)熱伴血小板減少綜合征病毒（Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV）樣顆粒的高效表達(dá)方法,本研究根據(jù)布尼亞病毒裝配成熟的機(jī)制,建立SFTS病毒包膜糖蛋白和核蛋白融合表達(dá)質(zhì)粒,并在表達(dá)載體中引入熒光蛋白報(bào)告基因,轉(zhuǎn)染中國倉鼠卵巢細(xì)胞,傳代培養(yǎng)兩代后,根據(jù)熒光蛋白表達(dá)水平,采用有限稀釋法,在熒光顯微鏡下,人工挑選細(xì)胞集落,建立病毒樣顆粒穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系,并通過熒光蛋白表達(dá)水平的變化,評價(jià)細(xì)胞系的穩(wěn)定性,采用間接免疫熒光、免疫印跡和電子顯微鏡對病毒樣顆粒進(jìn)行分析鑒定。結(jié)果顯示,融合表達(dá)的包膜糖蛋白和核蛋白可在細(xì)胞內(nèi)裝配形成病毒樣顆粒并分泌到胞外,在無選擇壓力條件下篩選的細(xì)胞系能夠在較長時(shí)間內(nèi)保持穩(wěn)定,傳代40次后報(bào)告基因表達(dá)水平無明顯變化。本研究顯示了通過病毒結(jié)構(gòu)蛋白基因的修飾,可以改進(jìn)病毒樣顆粒制備方法,為相關(guān)生物制品的生產(chǎn)技術(shù)研究提供了重要線索。 

【文章來源】：病毒學(xué)報(bào). 2015,31(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
材料與方法
    1細(xì)胞,毒株,載體和抗體
    2基因分離和表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建
    3轉(zhuǎn)染與細(xì)胞克隆篩選
    4間接免疫熒光
    5細(xì)胞系熒光穩(wěn)定性監(jiān)測
    6 VLPs制備與純化
    7 SDS-PAGE與免疫印跡試驗(yàn)
    8透射電鏡觀察
結(jié)果
    1表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建
    2細(xì)胞系建立與初步鑒定
    3 VLPs制備與鑒定
討論



本文編號：3453131