HIV在復(fù)制過(guò)程中與宿主分子發(fā)生相互作用,其中一種重要的宿主分子是microRNA。microRNA是一類成熟體長(zhǎng)度在19-22個(gè)核苷酸的非編碼RNA,在人體的多種生理和病理過(guò)程中發(fā)揮重要作用。已有的研究證據(jù)顯示microRNA和HIV之間存在相互影響,microRNA在HIV感染和疾病進(jìn)展過(guò)程中都起了重要作用。一方面HIV感染影響細(xì)胞中microRNA的表達(dá)譜,另一方面細(xì)胞中高表達(dá)抗HIV的microRNA不利于HIV在細(xì)胞中的復(fù)制而有利于病毒潛伏狀態(tài)的形成和維持。研究顯示細(xì)胞和體液中microRNA表達(dá)狀態(tài)與HIV感染嚴(yán)重程度和進(jìn)展有相關(guān)性。綜合上述研究證據(jù),可以看到microRNA在HIV感染領(lǐng)域作為一種干預(yù)手段和生物標(biāo)記物的前景。ART （antiretroviral therapy）的應(yīng)用在分子層面改變了細(xì)胞內(nèi)環(huán)境,影響了HIV與宿主細(xì)胞的相互作用過(guò)程。已有證據(jù)表明ART可以使體內(nèi)多種組織的mRNA表達(dá)譜及線粒體DNA表達(dá)狀態(tài)發(fā)生改變,這些改變與HIV感染的病理變化和疾病進(jìn)展相關(guān)。目前有關(guān)ART對(duì)microRNA表達(dá)譜影響的研究較少,也較少有研究涉及HIV感染過(guò)程中micro... 

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}samR-1}1過(guò)表達(dá)載體測(cè)序結(jié)果

hsa-miR-191-5p的表達(dá)量都在空白對(duì)照細(xì)胞的10倍以上（圖3.5A)，在48 h檢測(cè)的一個(gè)克隆的結(jié)果顯示hsa-miR-191-5p的表達(dá)量接近空白對(duì)照細(xì)胞的6倍(圖3.5C);在TZM-bl細(xì)胞中，轉(zhuǎn)染后24h，hsa-miR-191-5p的表達(dá)量在空白對(duì)照細(xì)胞的2.5倍(圖3.5B), 48 h時(shí)為空白對(duì)照細(xì)胞的5倍(圖3.5D)。

3.6 hsa-miR-191-5p mimic/inhibitor 及對(duì)照與 pNL4-3-dE-GFP/pVSV-G 共轉(zhuǎn)染驗(yàn)：hsa-miR_-191-5p mimic/inhibitor 及對(duì)照與 pNL4-3-dE-GFP 和 pVSV-G 共轉(zhuǎn)染，染48 h后檢測(cè)細(xì)胞上清中HIV:p24水平。2.2改變hsa-miR-191-5p水平的基礎(chǔ)上轉(zhuǎn)染pNL4-3-dE-GFP/pVSV-G的實(shí)驗(yàn)轉(zhuǎn)染 hsa-miR-191-5p mimic/inhibitor 或者 miR-191 過(guò)表達(dá)載體 24 h—48 h 后，sa-miR-191-5p已經(jīng)對(duì)標(biāo)起了抑制作用，此時(shí)轉(zhuǎn)染pNL4-3-dE-GFP/pVSV-G后觀細(xì)胞上清中HIV p24水平可以反映出hsa-mill-191-5p是否通過(guò)作用于乾標(biāo)影響 HIV的復(fù)制過(guò)程。2.2.1 先轉(zhuǎn)染 hsa-mill-191-5p mimic/inhibitor 及對(duì)照，后轉(zhuǎn)染L4-3-dE-GFP/pVSV-G, ELISA 檢測(cè)細(xì)胞上清 HIV p24 的實(shí)驗(yàn)


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