目的:建立核酸序列依賴(lài)擴(kuò)增技術(shù)（NASBA）檢測(cè)隱球菌RNA的方法,提高隱球菌感染診斷的準(zhǔn)確性。方法:設(shè)計(jì)一對(duì)具有隱球菌屬特異性的引物,構(gòu)建NASBA擴(kuò)增隱球菌RNA的方法并評(píng)價(jià)該方法的靈敏度和特異性。按歐洲癌癥研究和治療組織/侵襲性真菌感染協(xié)作組和美國(guó)變態(tài)反應(yīng)和感染病研究院真菌病研究組（EORTC/MSG）2008年修訂的侵襲性真菌病定義標(biāo)準(zhǔn)收集隱球菌感染的陽(yáng)性病例和排除隱球菌感染的陰性病例,分別應(yīng)用隱球菌莢膜多糖抗原檢測(cè)（膠體金法）、PCR及本研究建立的NASBA方法進(jìn)行檢測(cè)。應(yīng)用配對(duì)診斷試驗(yàn)設(shè)計(jì)、McNemar檢驗(yàn)分別對(duì)3種方法進(jìn)行比較以評(píng)價(jià)其診斷效能。結(jié)果:NASBA產(chǎn)物電泳結(jié)果顯示僅新型隱球菌RNA擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)了特異性條帶,而其他對(duì)照菌（煙曲霉、串珠鐮刀菌、金黃色葡萄球、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、白色念珠菌、近平滑念珠菌）均沒(méi)有出現(xiàn)電泳條帶;NASBA結(jié)合電泳檢測(cè)結(jié)果表明該方法靈敏度可達(dá)10 cfu/mL。NASBA、莢膜多糖抗原膠體金法及PCR靈敏度分別是87.5%（95%CI=66.53%～96.71%）、100%（95%CI=82.83%～100%）、66.67%（95... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,45(06)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

不同菌種NASBA擴(kuò)增后電泳結(jié)果

NASBA擴(kuò)增106 cfu/mL、105 cfu/mL、104 cfu/mL濃度隱球菌孢子數(shù)菌懸液提取的RNA，及其倍比稀釋后的相當(dāng)于孢子濃度分別為103 cfu/m L、102 cfu/m L、101 cfu/m L和100 cfu/m L的RNA，經(jīng)電泳方法檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)RNA對(duì)應(yīng)的孢子濃度為10 cfu/mL仍有陽(yáng)性條帶，推斷該方法靈敏度可達(dá)10 cfu/mL（圖3）。2.4 NABSA檢測(cè)的性能評(píng)價(jià)

NASBA擴(kuò)增產(chǎn)物的凝膠電泳結(jié)果表明，新型隱球菌RNA擴(kuò)增出約229 bp的片段，陰性對(duì)照無(wú)特異性的擴(kuò)增片段。擴(kuò)增產(chǎn)物RNA基因測(cè)序結(jié)果經(jīng)BLAST站點(diǎn)進(jìn)行序列比對(duì)，與新型隱球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株H99的CAP10序列一致（圖1）。2.2 特異性分析


本文編號(hào)：3367967