發(fā)布時(shí)間：2021-08-23 15:32

　　HIV感染可通過多種機(jī)制引起機(jī)體內(nèi)T細(xì)胞凋亡,其中,病毒的編碼蛋白可以根據(jù)其在靶細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)水平調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡。gp120蛋白作為HIV包膜蛋白的主要組成部分,既可以在細(xì)胞外與細(xì)胞表面的CD4分子結(jié)合導(dǎo)致靶細(xì)胞和旁觀者細(xì)胞凋亡,又可以在細(xì)胞內(nèi)上調(diào)Fas、FasL、TNF-α、TRAIL受體DR4和DR5的表達(dá)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,還可以使細(xì)胞滯留在G2期導(dǎo)致胞內(nèi)ROS升高促進(jìn)凋亡。研究顯示,CD45分子在HIV-1 gp120蛋白介導(dǎo)的CD4+T細(xì)胞凋亡中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用,在gp120蛋白的作用下,CD45分子通過調(diào)節(jié)FasL的表達(dá)參與細(xì)胞凋亡。作為I型跨膜糖蛋白,CD45分子主要以CD45RABC、CD45RO、CD45RA、CD45RB和CD45RC等異構(gòu)體形式表達(dá)于淋巴細(xì)胞,其胞外結(jié)構(gòu)域糖基化形式的差異對(duì)CD45異構(gòu)體活性和功能具有重要影響。目前,CD45異構(gòu)體在HIV感染引起的細(xì)胞凋亡方面研究甚少,為加深對(duì)CD45異構(gòu)體在細(xì)胞凋亡過程中作用的理解,本研究通過構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)CD45異構(gòu)體的細(xì)胞系,比較了CD45異構(gòu)體在調(diào)節(jié)gp120蛋白介導(dǎo)的CD4+T細(xì)胞凋亡過程中的差異,并進(jìn)一步分析了其下游分... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：98 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１流式檢測ＣＤ４５在Ｍ５．０１和Ｊｕｒｋａｔ細(xì)胞表面表達(dá)情況??

細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)組，孵育４８ｈ后，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞的凋亡情況。結(jié)果顯示，ｇｐｌ２０、??Ｂ１２或ＣＤ３抗體單獨(dú)處理并不能引起兩種細(xì)胞凋亡，ｇｐｌ２０?／?Ｂ１２?／?ＣＤ３抗體共同??處理組的Ｊｕｒｋａｔ細(xì)胞發(fā)生明顯凋亡，而該組的Ｊ４５．０１細(xì)胞并未發(fā)生明顯凋亡。圖２Ａ??中展示的為ＣＤ３抗體單獨(dú)處理組和ｇｐｌ２０?／?Ｂ１２?／?ＣＤ３抗體共同處理組的細(xì)胞凋亡??情況，從圖中可以看出，Ｊｕｒｋａｔ細(xì)胞發(fā)生較明顯的凋亡。三次獨(dú)立重復(fù)實(shí)驗(yàn)后，經(jīng)??統(tǒng)計(jì)學(xué)分析可知，與對(duì)照組相比，ＣＤ３抗體單獨(dú)處理組不能引發(fā)細(xì)胞凋亡，ｇｐｌ２０??／８１２復(fù)合物處理過的凋亡率為１４％±０．５６，』４５．０１凋亡率為６％±０．４８，見圖２８。??根據(jù)ＣＤ３抗體的促Ｔ細(xì)胞活化作用可知，在這個(gè)使用濃度下ＣＤ３抗體不引起細(xì)胞??凋亡，研究顯示，ＣＤ３抗體可通過細(xì)胞活化促進(jìn)ｇｐｌ２０?／?Ｂ１２復(fù)合物誘導(dǎo)．ｈｉｒｋａｔ細(xì)??胞凋亡，在此情況下，Ｊ４５．０１細(xì)胞由于缺失ＣＤ４５分子而不發(fā)生凋亡，因此ＣＤ４５??分子可調(diào)節(jié)ｇｐｌ２０?／?Ｂ１２復(fù)合物介導(dǎo)的Ｔ細(xì)胞凋亡。??Ａ??ｍ?ａｎｔｉ－ＣＤ３?ｇｐｌ２０／Ｂ１２／ａｎｔｉ－ＣＤ３??Ｉ?０．?５９?Ｉ?０．７５??Ｉ?５．２１?ＨＴ８??ｉ￣?：——ｗｔｉ?ＪＥ６＊１??ｓ?１零?Ｐ??％?…－一ｎ??ｒｉ?１?Ｉ?０．?７６?？?｜?０．７８??｝?１１．?３〇！?１?Ｉ?４．２１??１?１??�。荩蓿颍保剩矗担埃�??ｉ?ｉ??Ａｎｎｅｘｉｎ?Ｖ??２１??

亡可能其濃度有關(guān)，于是我們分別用ＯｎＭ、１０ｎＭ、２０ｎＭ、５０ｎＭ和１００ｎＭ的ｇｐｌ２０??／?Ｂ１２復(fù)合物濃度處理．ｌｕｒｋａｔ，孵育４８ｈ后檢測細(xì)胞的凋亡率，根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)繪制??折線圖，如圖３所示，隨著ｇｐｌ２０／Ｂ１２復(fù)合物濃度的增加，細(xì)胞凋亡率也隨之升??高，在濃度為１００ｎＭ時(shí)，細(xì)胞凋亡率為１５％左右，說明在一定范圍內(nèi)凋亡過程是??劑量依賴性的，ｇｐｌ２０?／?Ｂ１２復(fù)合物的濃度決定了細(xì)胞凋亡的程度。??２５－??２０－?Ｔ??ｔ?」??Ｕ）?１５－?１??〇?Ｔ〇?ｒ５〇?ｎＭ??ｇｐｌ２０／Ｂ１２復(fù)合物濃度??圖３不同濃度ｇｐｌ２０?／?Ｂ１２復(fù)合物對(duì)細(xì)胞凋亡的影響??Ｆｉｇ．３?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ｇｐｌ２０／Ｂ１２?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｏｎ?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ?ｏｆ?Ｊｕｒｋａｔ??２２??


本文編號(hào)：3358133