志賀菌屬是感染性腹瀉的主要病原體之一,引起菌痢。目前,菌痢的治療主要依賴于抗生素,隨著抗生素的濫用,志賀菌頻繁變異,不斷產(chǎn)生耐藥株,基因的水平轉(zhuǎn)移（horizontal gene transfer,HGT）是細菌獲得耐藥性的主要方式。研究發(fā)現(xiàn)成簇的規(guī)律間隔的短回文重復(fù)序列（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR）廣泛存在于細菌和古細菌的基因組中,其由重復(fù)序列（repeat）和間隔序列（spacer）構(gòu)成,與cas（CRIPSPR associated）組成CRISPR/Cas系統(tǒng),靶向裂解侵入的外源基因,限制HGT。目的本研究通過檢測志賀菌的CRISPR/Cas系統(tǒng)、耐藥表型及耐藥基因,分析CRISPR/Cas系統(tǒng)與耐藥的關(guān)系;并分析接合轉(zhuǎn)移及誘導(dǎo)耐藥前后CRISPR/Cas系統(tǒng)的變化,為深入闡明志賀菌中CRISPR/Cas系統(tǒng)對耐藥的調(diào)控提供依據(jù)。方法復(fù)蘇并鑒定實驗室保存的59株志賀菌,改良Kirby-Bauer法檢測耐藥表型、PCR擴增耐藥基因、cas,PCR擴增CRISPR并測序,CRISP... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

耐藥基因的PCR擴增產(chǎn)物

15圖 3.2 sul1 和 qnrA 的 PCR 擴增產(chǎn)物DNAmark；1、2 和 3：qnrA，823bp；4、5 和 6：sul1，822bp因 tem、oxa、 tetA、 tetB、 sul1、 sul2、 cat 和 qnrA 在見表 3.2。其中，所檢測的 59 株志賀菌均攜帶 β-內(nèi)酰胺外一種 β-內(nèi)酰胺類耐藥基因 oxa 的陽性率相對較低，為 59因 tetA 和 tetB 陽性率均較高，分別為 86.44%和 84.75%l1 的陽性率較高，為 89.83%，而 sul2 的陽性率相對較低，為cat及喹諾酮類耐藥基因qnrA 的陽性率亦較高，分別為83.0

結(jié)果 合轉(zhuǎn)移多耐藥前后志賀菌 CRISPR/Cas 系統(tǒng)的變化 接合轉(zhuǎn)移各菌株中 CRISPR/Cas 系統(tǒng)的 PCR 擴增結(jié)果敏感株 mel-sf-1998023/zz 中 CRISPR/Cas 系統(tǒng)的 PCR 擴增結(jié)果R 分別擴增出敏感志賀菌株 mel-sf-1998023/zz（接合轉(zhuǎn)移受體3 及 cas1、cas2 基因，CRISPR1、CRISPR2 及 cas3、cse1、csecas7 均未擴增出，如圖 3.3。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]兒童福氏志賀菌超廣譜β內(nèi)酰胺酶CTX-M基因型的研究[J]. 高春燕,劉樹平,高慶雙,王瑤.  中國熱帶醫(yī)學(xué). 2012(01)
[2]大腸埃希菌多重耐藥性的形成機制[J]. 呂殿紅,曾振靈,陳杖榴,蔣紅霞.  動物醫(yī)學(xué)進展. 2007(07)
[3]穩(wěn)定、無抗藥的痢疾福氏2a和宋內(nèi)雙價菌苗候選株的構(gòu)建[J]. 芮賢良,徐永強,王紅,蘇國富,黃翠芬.  生物工程學(xué)報. 1996(02)
[4]插入序列IS2的研究──Ⅱ．突變體的極性效應(yīng)和DNA序列分析[J]. 黃占景.  遺傳學(xué)報. 1996(02)

博士論文
[1]ISEcpl介導(dǎo)志賀菌耐藥的分子基礎(chǔ)研究[D]. 王穎芳.鄭州大學(xué) 2013

碩士論文
[1]志賀菌中CRISPR的分布及其結(jié)構(gòu)特征[D]. 薛澤潤.鄭州大學(xué) 2014
[2]志賀菌屬細菌耐藥相關(guān)質(zhì)粒的耐藥性研究[D]. 侯瑞娟.鄭州大學(xué) 2012
[3]志賀菌主動外排泵acrAB-tolC及調(diào)控基因marOR突變與耐藥的關(guān)系[D]. 任靜朝.鄭州大學(xué) 2010
[4]臨床分離志賀菌屬細菌膜耐藥機制的研究[D]. 徐瑾.鄭州大學(xué) 2005



本文編號：3260924