[目的]研究MicroRNA200a（miR-200a）對TGF-β誘導(dǎo)人肝星狀細(xì)胞（LX-2）活化與增殖的作用,探討miR-200a抑制TGF-β改善血吸蟲病肝纖維化的機(jī)制。[方法]細(xì)胞實(shí)驗(yàn)選用LX-2,將細(xì)胞培養(yǎng)至對數(shù)生長期,采用不同濃度（0、5、10、15ng/mL）的TGF-β1在不同時(shí)間點(diǎn)（0、24、48、72小時(shí)）刺激LX-2,用試劑盒提取細(xì)胞總RNA及蛋白,熒光定量PCR方法檢測LX-2中miR-200a、α-SMA、Colla I、TGF-β2的mRNA;western-blot方法檢測LX-2中TGF-β2的蛋白表達(dá);MTT法檢測細(xì)胞增殖率。用上述實(shí)驗(yàn)中獲得的TGF-β1最佳刺激濃度5ng/mL及最佳刺激時(shí)間48小時(shí)進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。構(gòu)建miR-200a mimics相關(guān)質(zhì)粒,利用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染技術(shù),分別將各質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至LX-2細(xì)胞中,細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分組為:PBS組、TGF-β1組、miR-200a mimics組、miR-200a mimics NC組、miR-200a inhibitor組及miR-200a inhibitor NC組共六組,孵育6小時(shí)后,除PBS組外,其它各組加入... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

qRT-PCR檢測不同時(shí)間TGF-β1對LX-2細(xì)胞中miR-200a表達(dá)水平的影響

4.2 qRT-PCR 檢測不同濃度 TGF-β1 對 LX-2 細(xì)胞中 miR-200a 表達(dá)水平的igure 4.2 The effect of different concentrations TGF-β1 on the expression levelmiR-200a in LX-2 cells were identified by qRT-PCR.*: P<0.05 vs 0ng/ml groupGF-β1 激活 LX-2 后纖維化因子的表達(dá)情況同濃度（0、5、10、15ng/mL）的 TGF-β1 分別加入 LX-2 細(xì)胞中培量 PCR 檢測，結(jié)果顯示：隨著 TGF-β1 濃度增加，α-SMA mRNA漸上升，各 TGF-β1 濃度組與 0ng/mL 組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（PmL 至 15ng/mL 之間 α-SMA mRNA 的表達(dá)水平無顯著性差異（圖

4.2 qRT-PCR 檢測不同濃度 TGF-β1 對 LX-2 細(xì)胞中 miR-200a 表達(dá)水平的影igure 4.2 The effect of different concentrations TGF-β1 on the expression levels omiR-200a in LX-2 cells were identified by qRT-PCR.*: P<0.05 vs 0ng/ml groupGF-β1 激活 LX-2 后纖維化因子的表達(dá)情況同濃度（0、5、10、15ng/mL）的 TGF-β1 分別加入 LX-2 細(xì)胞中培養(yǎng)量 PCR 檢測，結(jié)果顯示：隨著 TGF-β1 濃度增加，α-SMA mRNA 的漸上升，各 TGF-β1 濃度組與 0ng/mL 組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0mL 至 15ng/mL 之間 α-SMA mRNA 的表達(dá)水平無顯著性差異（圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]肝纖維化的細(xì)胞分子機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 涂傳濤,王吉耀.  中華肝臟病雜志. 2014 (01)
[2]轉(zhuǎn)化生長因子β1和結(jié)締組織生長因子在小鼠血吸蟲病肝纖維化中的表達(dá)[J]. 黃加權(quán),朱俊,李蘭,焦云桃,徐蕾,陶然,范翔雪,馬科,郭威,寧琴.  中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2012(01)
[3]認(rèn)識肝纖維化與晚期血吸蟲病的過去與未來[J]. 蔡衛(wèi)民.  中國血吸蟲病防治雜志. 2008(03)

博士論文
[1]肝纖維化相關(guān)microRNA的篩選及其功能研究[D]. 陳超.第二軍醫(yī)大學(xué) 2012

碩士論文
[1]上調(diào)宿主microRNA-203對血吸蟲病肝纖維化的影響[D]. 賽雪.第二軍醫(yī)大學(xué) 2013



本文編號：3248169