背景:HBV是一種嗜肝性DNA病毒,HBV感染不會引起直接的肝細胞病變。宿主免疫應(yīng)答決定了病毒能否被清除以及肝臟疾病的發(fā)展。中性粒細胞是人類最豐富的循環(huán)白細胞,與其他白細胞相比,它的壽命相對較短。作為抗感染的第一道防線,中性粒細胞表現(xiàn)出強大的抗細菌和抗真菌作用。然而,中性粒細胞在病毒感染中的作用一直被忽視。大量臨床研究發(fā)現(xiàn),慢性乙型肝炎患者中性粒細胞數(shù)量顯著高于健康對照組,并與肝臟炎癥和肝損傷相關(guān)。但慢性HBV感染患者中性粒細胞增多的機制及其作用尚不清楚。方法:收集初治的慢性HBV感染患者的臨床資料,分析中性粒細胞與HBV及其抗原之間的相關(guān)性。從健康人外周血中分離中性粒細胞,在HBV和表面抗原存在的條件下,單獨培養(yǎng)或與自體的PBMC、T淋巴細胞以及NK細胞共培養(yǎng)。通過Annexin V和7AAD雙染色、TUNEL和形態(tài)學(xué)觀察檢測中性粒細胞的凋亡;通過Western blot和實時定量PCR驗證HBV抑制中性粒細胞凋亡的信號途徑。通過檢測細胞表面分子、細胞因子、活性氧以及細胞外誘捕網(wǎng)等指標,反映中性粒細胞的活化狀態(tài)。通過流式細胞術(shù)檢測T淋巴細胞和NK細胞的凋亡、增殖和功能（包括脫顆粒效應(yīng)... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

基本研究思路

第3章結(jié)果25間的相關(guān)性。如圖3.1所示，spearman相關(guān)性分析顯示中性粒細胞絕對值與HBVDNA及HBsAg均為正相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)分別為0.317（P=0.011）、0.332（P=0.007）。這提示HBV和HBsAg是導(dǎo)致慢性HBV感染患者中性粒細胞增多的可能因素。圖3.1慢性HBV感染患者中性粒細胞與HBV及其抗原的相關(guān)性研究。收集64例慢性HBV感染患者的臨床數(shù)據(jù)，進行相關(guān)性分析。（A）中性粒細胞與HBVDNA相關(guān)性分析。（B）中性粒細胞與HBsAg相關(guān)性分析。3.2HBV和表面抗原抑制中性粒細胞的自發(fā)凋亡中性粒細胞本質(zhì)上是短壽命的吞噬細胞，發(fā)生組成性凋亡。因此推測HBV可能通過影響中性粒細胞的凋亡，導(dǎo)致慢性HBV感染患者中性粒細胞增多。為了驗證這一假設(shè)，用HBV或HBV表面抗原處理中性粒細胞并進行體外培養(yǎng)，采用了三種試驗方法來評估HBV對中性粒細胞凋亡的影響。在正式開始實驗之前，對分離純化的中性粒細胞進行純度鑒定。根據(jù)2.2中實驗方法從濃縮白細胞中分離中性粒細胞，取少量細胞進行流式檢測。未經(jīng)純化的濃縮白細胞經(jīng)紅細胞裂解處理后，進行流式檢測作為對照。如圖3.2所示，純化前的濃縮白細胞中除中性粒細胞外還含有其他細胞成分，其中中性粒細胞占61%。分離純化后的中性粒細胞純度在90%以上，可用于后續(xù)試驗。圖3.2中性粒細胞純度鑒定。

第3章結(jié)果25間的相關(guān)性。如圖3.1所示，spearman相關(guān)性分析顯示中性粒細胞絕對值與HBVDNA及HBsAg均為正相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)分別為0.317（P=0.011）、0.332（P=0.007）。這提示HBV和HBsAg是導(dǎo)致慢性HBV感染患者中性粒細胞增多的可能因素。圖3.1慢性HBV感染患者中性粒細胞與HBV及其抗原的相關(guān)性研究。收集64例慢性HBV感染患者的臨床數(shù)據(jù)，進行相關(guān)性分析。（A）中性粒細胞與HBVDNA相關(guān)性分析。（B）中性粒細胞與HBsAg相關(guān)性分析。3.2HBV和表面抗原抑制中性粒細胞的自發(fā)凋亡中性粒細胞本質(zhì)上是短壽命的吞噬細胞，發(fā)生組成性凋亡。因此推測HBV可能通過影響中性粒細胞的凋亡，導(dǎo)致慢性HBV感染患者中性粒細胞增多。為了驗證這一假設(shè)，用HBV或HBV表面抗原處理中性粒細胞并進行體外培養(yǎng)，采用了三種試驗方法來評估HBV對中性粒細胞凋亡的影響。在正式開始實驗之前，對分離純化的中性粒細胞進行純度鑒定。根據(jù)2.2中實驗方法從濃縮白細胞中分離中性粒細胞，取少量細胞進行流式檢測。未經(jīng)純化的濃縮白細胞經(jīng)紅細胞裂解處理后，進行流式檢測作為對照。如圖3.2所示，純化前的濃縮白細胞中除中性粒細胞外還含有其他細胞成分，其中中性粒細胞占61%。分離純化后的中性粒細胞純度在90%以上，可用于后續(xù)試驗。圖3.2中性粒細胞純度鑒定。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Inflammation scores predict survival for hepatitis B virus-related hepatocellular carcinoma patients after transarterial chemoembolization[J]. Dong-Sheng Zhou,Li Xu,Yao-Ling Luo,Feng-Ying He,Jun-Ting Huang,Yao-Jun Zhang,Min-Shan Chen.  World Journal of Gastroenterology. 2015(18)
[2]Neutrophil-lymphocyte ratio predicts the prognosis of patients with hepatocellular carcinoma after liver transplantation[J]. Guang-Qin Xiao,Chang Liu,Da-Li Liu,Jia-Yin Yang,Lu-Nan Yan.  World Journal of Gastroenterology. 2013(45)



本文編號：3243612