目的驗(yàn)證結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis, Mtb）基因Rv2626c編碼的低氧反應(yīng)蛋白1（hypoxic response protein 1, HRP1）為分泌蛋白。方法從Mtb H37Rv標(biāo)準(zhǔn)毒力株基因組上擴(kuò)增目的基因并添加His標(biāo)簽;運(yùn)用擴(kuò)增產(chǎn)物構(gòu)建重組質(zhì)粒,電轉(zhuǎn)入恥垢分枝桿菌（Mycobacterium smegmatis, Ms）（MC2 155）構(gòu)建重組菌;熱誘導(dǎo)重組菌表達(dá)蛋白,檢測培養(yǎng)濾液及細(xì)菌裂解液中蛋白的表達(dá)情況,將10 kDa培養(yǎng)濾液抗原（CFP-10）（Ms）和CFP-10（Mtb）設(shè)為陽性對(duì)照,將胞質(zhì)蛋白熱休克蛋白65（GroEL2）（Mtb）作為陰性對(duì)照。結(jié)果 PCR成功擴(kuò)增HRP1、GroEL2（Mtb）、CFP-10（Mtb）、CFP-10（Ms）,并且重組質(zhì)粒測序峰單一且信號(hào)穩(wěn)定,鑒定重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。成功構(gòu)建重組Ms并實(shí)現(xiàn)蛋白GroEL2（Mtb）、CFP-10（Mtb）、CFP-10（Ms）、HRP1在Ms中的表達(dá)。在重組菌裂解液中和培養(yǎng)基濾液中均檢測到目標(biāo)蛋白HRP1;結(jié)果與陽性對(duì)照CFP-10一致;陰性對(duì)照Gr... 

【文章來源】：四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2020,51(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁


本文編號(hào)：3210192