病毒性疾病嚴重危害人類身體健康,據(jù)聯(lián)合國艾滋病聯(lián)合規(guī)劃署和世界衛(wèi)生組織最新數(shù)據(jù)統(tǒng)計,自1986年6月5日第一次確認艾滋病以來,艾滋病已造成2500多萬人死亡。同時隨著全球化進程加快,人員流動性增加,使得病毒的傳播更為便捷。因此了解病毒的感染機制以及制定相應的治療策略就顯得尤為重要。干擾素作為機體在抵御病毒感染過程中重要的效應分子,對于病毒性疾病的治療具有十分重要的意義。干擾素通過與干擾素受體結合,誘導下游300多種干擾素誘導基因的產生進而在病毒感染中發(fā)揮重要作用,但大部分干擾素誘導基因的功能仍處于未知狀態(tài)。為此,本課題組分別采用重組人干擾素α和干擾素γ分別對人的外周血單個核細胞和小鼠骨髓來源巨噬細胞進行刺激,采用高通量RNA-seq技術篩查和評價245000個轉錄本中差異表達的基因,進而發(fā)現(xiàn)G蛋白偶聯(lián)受體家族成員GPR171的表達顯著升高。與此同時我們也發(fā)現(xiàn)GPR171的表達在病毒感染時也會明顯上升。為了探究干擾素誘導GPR171表達的分子機制,我們采用干擾素受體封閉、干擾素受體下游JAK抑制劑處理發(fā)現(xiàn)均能顯著抑制干擾素誘導的GPR171表達,表現(xiàn)出典型的干擾素誘導基因的特征。隨后采用... 

【文章來源】：華東師范大學上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 研究背景
    1.病毒嚴重危害人類的生命健康
    2.干擾素和干擾素誘導基因在病毒感染中發(fā)揮重要作用
    3.干擾素相關信號通路受到機體的精確調控
    4.GPCR對于細胞內信號轉導具有重要的調控作用
    5.GPCR在病毒感染中發(fā)揮重要作用
    6.GPR171目前的研究進展
    7.課題研究目的以及意義
第二章 實驗材料與方法
    1.實驗材料
        1.1.實驗小鼠及細胞
        1.2.實驗試劑
        1.3.實驗器材及耗材
        1.4.試劑配制
        1.5.引物序列
    2.實驗方法
        2.1.熒光定量PCR
        2.2.基因敲除技術（CRISPR/cas9）
        2.3.VSV病毒擴增
        2.4.病毒滴度檢測
        2.5.免疫印跡法 (Western blot)
        2.6.小鼠骨髓來源巨噬細胞（BMDM）的提取
        2.7.小鼠腹腔來源巨噬細胞（PEM）的提取
        2.8.小鼠嗅球VSV感染模型
        2.9.小鼠腹腔VSV感染模型
        2.10.結晶紫染色
        2.11.L929上清的制備
        2.12.轉染步驟
        2.13.GPR171-sh RNA的構建
    3.統(tǒng)計學分析
第三章．實驗結果和討論
    第一節(jié). GPR171是干擾素誘導基因
        1.干擾素誘導GPR171的表達
        2.干擾素通過NF-κB信號通路誘導GPR171表達上調
        3.病毒感染促進了GPR171的表達
    第二節(jié). 過表達GPR171及其配體Biglen促進病毒的復制
        1.過表達GPR171能促進VSV的復制
        2.過表達GPR171能促進HSV和NDV的復制
        3.GPR171配體Biglen促進病毒的復制
        4.干擾GPR171的表達下調VSV的復制
    第三節(jié). GPR171敲除后病毒的復制減少
        1.CRISPR/cas9技術構建GPR171敲除小鼠
        2.巨噬細胞敲除GPR171降低病毒復制
        3.Biglen通過GPR171促進病毒的復制
        4.VSV腹腔感染模型中，GPR171敲除小鼠VSV的表達量減少
        5.VSV嗅球感染模型中，GPR171敲除的小鼠嗅球中的VSV量明顯減少
    第四節(jié). GPR171通過影響干擾素信號通路來促進病毒的復制
        1.GPR171不影響干擾素的表達
        2.GPR171通過抑制干擾素下游的干擾素誘導基因的表達來達到促進病毒復制
    第五節(jié)：結論與展望
附錄Ⅰ 縮略詞
附錄Ⅱ 攻讀碩士學位期間科研工作成果
    科研工作成果
參考文獻
致謝



本文編號：3197274