發(fā)布時(shí)間：2021-05-20 06:32

　　病毒性疾病嚴(yán)重危害人類(lèi)身體健康,據(jù)聯(lián)合國(guó)艾滋病聯(lián)合規(guī)劃署和世界衛(wèi)生組織最新數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì),自1986年6月5日第一次確認(rèn)艾滋病以來(lái),艾滋病已造成2500多萬(wàn)人死亡。同時(shí)隨著全球化進(jìn)程加快,人員流動(dòng)性增加,使得病毒的傳播更為便捷。因此了解病毒的感染機(jī)制以及制定相應(yīng)的治療策略就顯得尤為重要。干擾素作為機(jī)體在抵御病毒感染過(guò)程中重要的效應(yīng)分子,對(duì)于病毒性疾病的治療具有十分重要的意義。干擾素通過(guò)與干擾素受體結(jié)合,誘導(dǎo)下游300多種干擾素誘導(dǎo)基因的產(chǎn)生進(jìn)而在病毒感染中發(fā)揮重要作用,但大部分干擾素誘導(dǎo)基因的功能仍處于未知狀態(tài)。為此,本課題組分別采用重組人干擾素α和干擾素γ分別對(duì)人的外周血單個(gè)核細(xì)胞和小鼠骨髓來(lái)源巨噬細(xì)胞進(jìn)行刺激,采用高通量RNA-seq技術(shù)篩查和評(píng)價(jià)245000個(gè)轉(zhuǎn)錄本中差異表達(dá)的基因,進(jìn)而發(fā)現(xiàn)G蛋白偶聯(lián)受體家族成員GPR171的表達(dá)顯著升高。與此同時(shí)我們也發(fā)現(xiàn)GPR171的表達(dá)在病毒感染時(shí)也會(huì)明顯上升。為了探究干擾素誘導(dǎo)GPR171表達(dá)的分子機(jī)制,我們采用干擾素受體封閉、干擾素受體下游JAK抑制劑處理發(fā)現(xiàn)均能顯著抑制干擾素誘導(dǎo)的GPR171表達(dá),表現(xiàn)出典型的干擾素誘導(dǎo)基因的特征。隨后采用... 

【文章來(lái)源】：華東師范大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：82 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 研究背景
    1.病毒嚴(yán)重危害人類(lèi)的生命健康
    2.干擾素和干擾素誘導(dǎo)基因在病毒感染中發(fā)揮重要作用
    3.干擾素相關(guān)信號(hào)通路受到機(jī)體的精確調(diào)控
    4.GPCR對(duì)于細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)具有重要的調(diào)控作用
    5.GPCR在病毒感染中發(fā)揮重要作用
    6.GPR171目前的研究進(jìn)展
    7.課題研究目的以及意義
第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    1.實(shí)驗(yàn)材料
        1.1.實(shí)驗(yàn)小鼠及細(xì)胞
        1.2.實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3.實(shí)驗(yàn)器材及耗材
        1.4.試劑配制
        1.5.引物序列
    2.實(shí)驗(yàn)方法
        2.1.熒光定量PCR
        2.2.基因敲除技術(shù)（CRISPR/cas9）
        2.3.VSV病毒擴(kuò)增
        2.4.病毒滴度檢測(cè)
        2.5.免疫印跡法 (Western blot)
        2.6.小鼠骨髓來(lái)源巨噬細(xì)胞（BMDM）的提取
        2.7.小鼠腹腔來(lái)源巨噬細(xì)胞（PEM）的提取
        2.8.小鼠嗅球VSV感染模型
        2.9.小鼠腹腔VSV感染模型
        2.10.結(jié)晶紫染色
        2.11.L929上清的制備
        2.12.轉(zhuǎn)染步驟
        2.13.GPR171-sh RNA的構(gòu)建
    3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第三章．實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論
    第一節(jié). GPR171是干擾素誘導(dǎo)基因
        1.干擾素誘導(dǎo)GPR171的表達(dá)
        2.干擾素通過(guò)NF-κB信號(hào)通路誘導(dǎo)GPR171表達(dá)上調(diào)
        3.病毒感染促進(jìn)了GPR171的表達(dá)
    第二節(jié). 過(guò)表達(dá)GPR171及其配體Biglen促進(jìn)病毒的復(fù)制
        1.過(guò)表達(dá)GPR171能促進(jìn)VSV的復(fù)制
        2.過(guò)表達(dá)GPR171能促進(jìn)HSV和NDV的復(fù)制
        3.GPR171配體Biglen促進(jìn)病毒的復(fù)制
        4.干擾GPR171的表達(dá)下調(diào)VSV的復(fù)制
    第三節(jié). GPR171敲除后病毒的復(fù)制減少
        1.CRISPR/cas9技術(shù)構(gòu)建GPR171敲除小鼠
        2.巨噬細(xì)胞敲除GPR171降低病毒復(fù)制
        3.Biglen通過(guò)GPR171促進(jìn)病毒的復(fù)制
        4.VSV腹腔感染模型中，GPR171敲除小鼠VSV的表達(dá)量減少
        5.VSV嗅球感染模型中，GPR171敲除的小鼠嗅球中的VSV量明顯減少
    第四節(jié). GPR171通過(guò)影響干擾素信號(hào)通路來(lái)促進(jìn)病毒的復(fù)制
        1.GPR171不影響干擾素的表達(dá)
        2.GPR171通過(guò)抑制干擾素下游的干擾素誘導(dǎo)基因的表達(dá)來(lái)達(dá)到促進(jìn)病毒復(fù)制
    第五節(jié)：結(jié)論與展望
附錄Ⅰ 縮略詞
附錄Ⅱ 攻讀碩士學(xué)位期間科研工作成果
    科研工作成果
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3197274