人偏肺病毒（human metapneumovirus,hMPV）是引起兒童急性下呼吸道感染的重要病原。其引起的重癥肺炎、呼吸衰竭、多臟器損害對(duì)免疫缺陷者、移植后病人、老人可能帶來致死性后果。與其他病毒協(xié)同作用可顯著增加原有感染的嚴(yán)重程度。但是目前,臨床上尚無有效的疫苗可用于預(yù)防。本課題組前期致力于hMPV入胞機(jī)制的研究,以期通過阻斷入胞而達(dá)到減少病毒感染的目的。我們課題組前期研究證實(shí)hMPV通過胞吞方式入胞,并且同時(shí)證實(shí)脂筏在hMPV胞吞過程起重要作用。脂筏是細(xì)胞膜上具有轉(zhuǎn)運(yùn)功能的微結(jié)構(gòu)域,膽固醇是其重要組成成分,在其結(jié)構(gòu)和功能中起重要作用�；诖税l(fā)現(xiàn),我們推測(cè)降低膽固醇的藥物或許可通過抑制脂筏的合成從而降低hMPV病毒感染復(fù)制進(jìn)而抑制感染。而他汀類藥物是作為臨床廣泛使用的一類安全廉價(jià)的降脂藥。本研究擬選取臨床常用的他汀類藥物-辛伐他汀為研究目標(biāo),從體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)水平探討其對(duì)hMPV感染的影響及可能的作用機(jī)制。這種“老藥新用”的嘗試或許能為hMPV預(yù)防和治療提供新的研究策略和研究思路和治療策略。 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

hMPV感染VeroE6細(xì)胞后GFP表達(dá)情況

圖 1-2 辛伐他汀和外源性膽固醇對(duì) hMPV 復(fù)制和釋放的影響Figure 1-2 Effect of simvastain and exogenous cholesterol on hMPV replication andrelease in 16HBE cells2.3 辛伐他汀對(duì) hMPV 胞吞入胞量的影響不同濃度辛伐他汀(20, 40μM) 37℃處理 16HBE 一小時(shí)后接入 MOI=10 的hMPV 后固定，間接免疫熒光染色，運(yùn)用激光共聚焦顯微技術(shù)觀察 hMPV-N 蛋白的紅色熒光在 16HBE 細(xì)胞內(nèi)的分布情況。(A) 40μM 辛伐他汀處理后，16HBE 細(xì)胞內(nèi)的 hMPV-N 紅色熒光明顯減少，補(bǔ)充 500μM 外源性膽固醇后，部分細(xì)胞內(nèi)的hMPV-N 紅色熒光增加；用 CTB（綠色熒光）標(biāo)記脂筏。CTB 入胞量被辛伐他汀抑制，其抑制作用能被膽固醇逆轉(zhuǎn)。(B) 統(tǒng)計(jì) 10 個(gè)細(xì)胞中 hMPV-N 紅色熒光點(diǎn)數(shù)。(C) 統(tǒng)計(jì) 10 個(gè)細(xì)胞中的 CTB 平均熒光強(qiáng)度。

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文.4 流式檢測(cè)辛伐他汀對(duì) hMPV-GFP 熒光陽(yáng)性率的影響在構(gòu)建過程中，綠色熒光蛋白（GFP）的基因被插入到 hMPV 的 F 基因質(zhì)，因此實(shí)驗(yàn)所用的 hMPV 能發(fā)出綠色熒光，且綠色熒光陽(yáng)性率可代表 hMPV率。使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)辛伐他汀對(duì) hMPV-GFP 熒光陽(yáng)性率的影響（圖 1-4）MSO 和 20μM 辛伐他汀對(duì) hMPV 感染沒有影響。然而，40μM 辛伐他汀導(dǎo)致 G光強(qiáng)度降低 13％，即辛伐他汀降低了病毒感染。進(jìn)一步地，當(dāng)補(bǔ)充外源性膽后，GFP 的降低率恢復(fù)至 8％，即辛伐他汀對(duì)病毒感染的抑制作用可被外源性醇部分逆轉(zhuǎn)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Lipid dysregulation in hepatitis C virus, and impact of statin therapy upon clinical outcomes[J]. Tracey G Simon,Adeel A Butt.  World Journal of Gastroenterology. 2015(27)



本文編號(hào)：3139868