通過蛋白組學(xué)方法初步篩選影響瘧原蟲配子體感染活力的基因
發(fā)布時間：2021-03-11 01:56
目的:瘧疾是瘧原蟲通過媒介昆蟲蚊傳播的最為嚴(yán)重的寄生原蟲感染性疾病,有數(shù)十萬人因罹患瘧疾而死亡。瘧原蟲的發(fā)育經(jīng)歷肝內(nèi)期、紅內(nèi)期和蚊內(nèi)期三個發(fā)育階段,以及脊椎動物和昆蟲蚊兩任宿主。配子體是連接瘧原蟲脊椎宿主和蚊宿主之間的唯一橋梁,是導(dǎo)致人蚊傳播的關(guān)鍵。在瘧原蟲發(fā)育過程中,存在自然傳播阻斷現(xiàn)象,即隨著瘧原蟲的增殖,配子體數(shù)量增加但配子體的感染力卻出現(xiàn)降低的現(xiàn)象。說明配子體是瘧原蟲發(fā)育過程中的重要環(huán)節(jié),探討其在自然傳播阻斷現(xiàn)象中的機(jī)制,無疑為阻斷人蚊傳播、根治瘧疾疾病提供新的科研思路及解決方法。本研究通過蛋白質(zhì)組學(xué)方法比較感染后不同時間瘧原蟲配子體表達(dá)蛋白的差異,初步篩選影響瘧原蟲配子體活力的相關(guān)蛋白基因,并通過基因重組技術(shù)對候選基因進(jìn)行生物學(xué)功能預(yù)判。研究方法:1.鼠瘧模型建立及配子體活力檢測。6-8周,雌性BALB/c小鼠腹腔注射1×106個野生型約氏瘧原蟲（Plasmodium yoelii）和伯氏瘧原蟲（Plasmodium berghei）感染紅細(xì)胞,感染后第2天動態(tài)監(jiān)測小鼠紅細(xì)胞感染率及配子體率;雄配子出絲情況;體外動合子培養(yǎng)數(shù)量。2.篩選感染不同時間瘧原蟲...
【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省
【文章頁數(shù)】：56 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
自然傳播阻斷現(xiàn)象圖1A,B為伯氏瘧原蟲感染率，配子體率，出絲，動合子；圖1C,D為約氏瘧原蟲感染率，配子體率，出絲，動合子；*.P<0.05,**.P<0.01
中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文16圖2檢驗(yàn)生物重復(fù)或技術(shù)重復(fù)樣本的定量結(jié)果圖2B中重復(fù)樣本之間的聚集程度越好代表定量重復(fù)性越好此系數(shù)是度量兩組數(shù)據(jù)線性相關(guān)程度的值：圖2C當(dāng)皮爾森系數(shù)越接近-1為負(fù)相關(guān)，越接近1為正相關(guān)，越接近0為不相關(guān)。橫軸是相對定量蛋白質(zhì)值的log2對數(shù)值，縱軸是顯著性檢驗(yàn)的p值的log-log10值。以1.5的差異系數(shù)為極限，圖右側(cè)的數(shù)字表示明顯差異表達(dá)的上調(diào)蛋白，左側(cè)的數(shù)字表示明顯差異表達(dá)的下調(diào)蛋白（圖3A），頻率直方圖表示上調(diào)蛋白質(zhì)的數(shù)量在左側(cè)，是下調(diào)蛋白質(zhì)的數(shù)量（3B），說明瘧原蟲感染后第5天的蛋白質(zhì)組和第3天相比，有167個基因表達(dá)蛋白上調(diào)，106個基因表達(dá)蛋白下調(diào)。
中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文17圖3差異表達(dá)蛋白數(shù)量紅色表示顯著差異表達(dá)量上調(diào)蛋白數(shù)量，藍(lán)色表示顯著差異表達(dá)下調(diào)蛋白數(shù)量通過PlasmoDB數(shù)據(jù)預(yù)測167個上調(diào)基因中有紅內(nèi)期轉(zhuǎn)錄基因101個，配子體期轉(zhuǎn)錄基因29個，紅內(nèi)期和配子體兩個時期均有的轉(zhuǎn)錄基因?yàn)?7個，紅內(nèi)期轉(zhuǎn)錄基因占總上調(diào)基因82.63%；106個下調(diào)基因中紅內(nèi)期轉(zhuǎn)錄基因9個，配子體期轉(zhuǎn)錄基因81個，紅內(nèi)期和配子體兩個時期均有的轉(zhuǎn)錄基因?yàn)?6個，配子體期轉(zhuǎn)錄基因占總下調(diào)基因91.51%（圖4A）。上調(diào)基因中多為紅內(nèi)期轉(zhuǎn)錄蛋白，說明感染5天后，瘧原蟲紅內(nèi)期無性增殖的瘧原蟲活力正常，原蟲處于良好的增殖狀態(tài)。而感染后5天瘧原蟲總蛋白中表達(dá)下調(diào)基因主要是表達(dá)于配子體期的蛋白，進(jìn)一步說明隨著瘧原蟲感染進(jìn)程，雖然配子體的數(shù)量持續(xù)增多，但其蛋白表達(dá)卻呈下調(diào)狀態(tài)。81個下調(diào)的配子體期蛋白只在雌配子體期轉(zhuǎn)錄的有4個，只在雄配子體期轉(zhuǎn)錄的有71個，雌雄配子體期均轉(zhuǎn)錄的有6個（圖4B）。感染過程中蛋白表達(dá)下調(diào)得基因主要存在于雄性配子體。
本文編號：3075660
【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省
【文章頁數(shù)】：56 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
自然傳播阻斷現(xiàn)象圖1A,B為伯氏瘧原蟲感染率，配子體率，出絲，動合子；圖1C,D為約氏瘧原蟲感染率，配子體率，出絲，動合子；*.P<0.05,**.P<0.01
中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文16圖2檢驗(yàn)生物重復(fù)或技術(shù)重復(fù)樣本的定量結(jié)果圖2B中重復(fù)樣本之間的聚集程度越好代表定量重復(fù)性越好此系數(shù)是度量兩組數(shù)據(jù)線性相關(guān)程度的值：圖2C當(dāng)皮爾森系數(shù)越接近-1為負(fù)相關(guān)，越接近1為正相關(guān)，越接近0為不相關(guān)。橫軸是相對定量蛋白質(zhì)值的log2對數(shù)值，縱軸是顯著性檢驗(yàn)的p值的log-log10值。以1.5的差異系數(shù)為極限，圖右側(cè)的數(shù)字表示明顯差異表達(dá)的上調(diào)蛋白，左側(cè)的數(shù)字表示明顯差異表達(dá)的下調(diào)蛋白（圖3A），頻率直方圖表示上調(diào)蛋白質(zhì)的數(shù)量在左側(cè)，是下調(diào)蛋白質(zhì)的數(shù)量（3B），說明瘧原蟲感染后第5天的蛋白質(zhì)組和第3天相比，有167個基因表達(dá)蛋白上調(diào)，106個基因表達(dá)蛋白下調(diào)。
中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文17圖3差異表達(dá)蛋白數(shù)量紅色表示顯著差異表達(dá)量上調(diào)蛋白數(shù)量，藍(lán)色表示顯著差異表達(dá)下調(diào)蛋白數(shù)量通過PlasmoDB數(shù)據(jù)預(yù)測167個上調(diào)基因中有紅內(nèi)期轉(zhuǎn)錄基因101個，配子體期轉(zhuǎn)錄基因29個，紅內(nèi)期和配子體兩個時期均有的轉(zhuǎn)錄基因?yàn)?7個，紅內(nèi)期轉(zhuǎn)錄基因占總上調(diào)基因82.63%；106個下調(diào)基因中紅內(nèi)期轉(zhuǎn)錄基因9個，配子體期轉(zhuǎn)錄基因81個，紅內(nèi)期和配子體兩個時期均有的轉(zhuǎn)錄基因?yàn)?6個，配子體期轉(zhuǎn)錄基因占總下調(diào)基因91.51%（圖4A）。上調(diào)基因中多為紅內(nèi)期轉(zhuǎn)錄蛋白，說明感染5天后，瘧原蟲紅內(nèi)期無性增殖的瘧原蟲活力正常，原蟲處于良好的增殖狀態(tài)。而感染后5天瘧原蟲總蛋白中表達(dá)下調(diào)基因主要是表達(dá)于配子體期的蛋白，進(jìn)一步說明隨著瘧原蟲感染進(jìn)程，雖然配子體的數(shù)量持續(xù)增多，但其蛋白表達(dá)卻呈下調(diào)狀態(tài)。81個下調(diào)的配子體期蛋白只在雌配子體期轉(zhuǎn)錄的有4個，只在雄配子體期轉(zhuǎn)錄的有71個，雌雄配子體期均轉(zhuǎn)錄的有6個（圖4B）。感染過程中蛋白表達(dá)下調(diào)得基因主要存在于雄性配子體。
本文編號：3075660
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