本文關(guān)鍵詞：Let-7b介導(dǎo)甲型流感病毒減毒株的安全性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景：流感作為一種危害嚴(yán)重的傳染病,在全世界廣泛流行。其中甲型流感病毒以高易感性,快傳播性,嚴(yán)重威脅著社會(huì)公共衛(wèi)生安全。流感疫苗是目前預(yù)防流感病毒感染的最有效方法。然而目前研發(fā)上市的流感減毒活疫苗不能與最新變異的流感病毒抗原密切匹配,因此不具有最佳保護(hù)功效。MicroRNA (miRNA)介導(dǎo)的基因沉默技術(shù)為新型流感疫苗的研發(fā)提供了新思路。本課題組前期以南京2009甲型H1N1流感病毒株(A/Nanjing/108/2009H1N1)為背景株,在反向遺傳學(xué)的基礎(chǔ)上通過堿基突變將miRNA let-7b(let-7b)的結(jié)合靶位裝載進(jìn)病毒PB1基因片段,成功構(gòu)建let-7b介導(dǎo)甲型流感病毒減毒株,并在體外實(shí)驗(yàn)中證實(shí)其復(fù)制能力下降。然而病毒是否成功減毒最終需要體內(nèi)試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證,即證實(shí)減毒病毒株在動(dòng)物體內(nèi)是安全的。臨床前動(dòng)物試驗(yàn)檢測減毒病毒毒力是獲得安全疫苗的第一步,也是關(guān)鍵一步。本項(xiàng)研究旨在驗(yàn)證let-7b介導(dǎo)的甲型流感減毒株(miRT-H1N1)在小鼠體內(nèi)是安全的。方法：經(jīng)鼻滴入107TCID50～103TCID505個(gè)稀釋度病毒miRT-H1N1、wild type (wt)-H1N1和scramble (scbl)-H1N1構(gòu)建小鼠模型；連續(xù)14天監(jiān)測小鼠體重變化,記錄生存率,計(jì)算半數(shù)致死量。隨機(jī)選取另一批小鼠經(jīng)鼻滴入105TCID50稀釋度病毒,分別于感染后第3、5、8、10、14天取肺臟組織;觀察比較感染不同病毒組小鼠的肺臟損傷程度,比較不同病毒株在肺臟組織的復(fù)制差異,包括檢測病毒滴度和病毒核酸復(fù)制水平。檢測肺組織IL-6、TNF-α及IFN-β的表達(dá)水平,評(píng)估炎癥反應(yīng)程度。結(jié)果：接種miRT-H1N1的小鼠體重下降不明顯(下降10%),生存率為100%,即使接種最高劑量(LD50107 TCID50)也不會(huì)引起小鼠死亡；肺臟組織中miRT-H1N1病毒復(fù)制明顯受限,病毒載量與wt-H1N1和scbl-H1N1相比下降超過100倍。除此之外,感染miRT-H1N1的小鼠肺臟組織損傷最輕,促炎因子和趨化因子表達(dá)水平顯著下降,炎癥反應(yīng)顯著減輕。結(jié)論：miRT-H1N1的毒力在小鼠肺臟組織中顯著減弱,這表明miRT-H1N1在小鼠體內(nèi)是安全的。miRNA介導(dǎo)的基因沉默技術(shù)為減毒疫苗的構(gòu)建提供了一種可供選擇的途徑。
【關(guān)鍵詞】：Let-7b 流感病毒 安全性 疫苗 小鼠
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R511.7;R392
【目錄】：

• 中英文縮略詞表7-9
• 中文摘要9-11
• 英文摘要11-13
• 緒論13-16
• 材料和方法16-22
• 結(jié)果22-34
• 討論34-41
• 全文總結(jié)41-42
• 參考文獻(xiàn)42-47
• 附錄47-59
• 一、綜述47-58
• 參考文獻(xiàn)54-58
• 二、碩士期間發(fā)表文章58-59
• 致謝59-60

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