目的:泡球蚴源性外泌體對巨噬細(xì)胞的極化作用,并探索出促進(jìn)巨噬細(xì)胞極化的最適濃度。方法:1.從感染泡球蚴的BALB/c小鼠病灶中泡球蚴原頭節(jié),進(jìn)行體外培養(yǎng),收集上清,分離獲取上清中泡球蚴源性外泌體。2.巨噬細(xì)胞培養(yǎng)并誘導(dǎo)為成熟M1型巨噬細(xì)胞。3.設(shè)置不同的外泌體濃度分別與M1型巨噬細(xì)胞共同培養(yǎng),4.檢測M1和M2型巨噬細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子及表面抗體,同時確定泡球蚴源性外泌體與巨噬細(xì)胞作用的最佳濃度。ELISA和流式細(xì)胞技術(shù)分別檢測M1型巨噬細(xì)胞相關(guān)指標(biāo):IL-6、TGF-α及表面CD16/32分子表達(dá)水平,M2型巨噬細(xì)胞指標(biāo):IL-10水平;表面CD206和CD369分子表達(dá)水平,統(tǒng)計分析。結(jié)果:我們成功構(gòu)建泡球蚴原頭節(jié)感染BALB/c小鼠模型,并在感染小鼠病灶的病理組織切片中找到原頭節(jié),在培養(yǎng)原頭節(jié)的上清中,透射電鏡下觀察到大小約100nm,多為圓形,形似杯樣或茶托樣的外泌體,表面特異性分子TSG101和CD9表達(dá)陽性,CD63為弱陽性。將不予外泌體刺激作為空白對照,不同濃度外泌體與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)72h,ELISA檢測結(jié)果顯示細(xì)胞因子TGF-α、IL-10和IL-6表達(dá)水平均有不同程度升高... 

【文章來源】：青海大學(xué)青海省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：44 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要符號對照表
第一章 前言
第二章 材料與器材
    2.1 材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 巨噬細(xì)胞
    2.2 主要試劑
    2.3 主要儀器
第三章 實驗方法
    3.1 泡球蚴源性外泌體獲取
        3.1.1 構(gòu)建泡球蚴感染BALB/c小鼠模型
        3.1.2 泡球蚴原頭節(jié)的提取
        3.1.3 泡球蚴原頭節(jié)培養(yǎng)及上清收集
        3.1.4 泡球蚴源性外泌體的提取（使用超速離心法提�。�
        3.1.5 泡球蚴源性外泌體的鑒定
        3.1.6 泡球蚴源性外泌體的濃度檢測（蛋白濃度測定間接測定外泌體濃度）
        3.1.7 Western Blot檢測方法
    3.2 ELISA的使用
    3.3 流式細(xì)胞儀的使用
    3.4 實驗路線圖
    3.5 統(tǒng)計學(xué)方法
第四章 實驗結(jié)果
    4.1 感染泡球蚴的BALB/c小鼠模型及鑒定
        4.1.1 感染泡球蚴的BALB/c小鼠模型
        4.1.2 感染泡球蚴的BALB/c小鼠模型的鑒定
    4.2 泡球蚴源性外泌體鑒定
    4.3 流式實驗檢測結(jié)果
    4.4 ELISA實驗檢測結(jié)果
    4.5 M2/M1型巨噬細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子及表面分子的比值
第五章 討論
第六章 結(jié)論
    6.1 結(jié)論
    6.2 不足之處
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄 綜述 寄生蟲源性外泌體在寄生蟲感染與免疫中的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]巨噬細(xì)胞極化在小鼠泡型包蟲病中的作用[J]. 王東旭,王虎,樊海寧,王海久,王志鑫,湯鋒,廖夢姣,王強(qiáng).  中國高原醫(yī)學(xué)與生物學(xué)雜志. 2018(02)
[2]寄生蟲來源的外泌體及其功能研究進(jìn)展[J]. 范曉斌,何興,潘衛(wèi)慶.  中國熱帶醫(yī)學(xué). 2017(12)
[3]M2型巨噬細(xì)胞極化及相關(guān)疾病的研究進(jìn)展[J]. 鄭新,王紅艷.  生命科學(xué). 2017(09)
[4]復(fù)雜肝包蟲病的外科治療[J]. 陳哲宇.  中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志. 2017(07)
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[7]巨噬細(xì)胞極化信號通路及其調(diào)控機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 田媛,劉起會,朱迅,閆東梅.  現(xiàn)代免疫學(xué). 2015(05)
[8]外泌體及其在腫瘤診療中的意義[J]. 張敏,張晨光,丁衛(wèi).  生理科學(xué)進(jìn)展. 2014(05)
[9]中性粒細(xì)胞殺滅陰道毛滴蟲作用的研究[J]. 趙建玲,高興政,屈明.  中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2008(05)
[10]阿苯達(dá)唑治療泡球蚴病患者血清中Th1/Th2型細(xì)胞因子的變化及臨床意義[J]. 李富榮,石佑恩,史大中,DA Vuitton,PS Craig.  中國人獸共患病雜志. 2003(02)

博士論文
[1]旋毛蟲排泄分泌物調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞及成肌細(xì)胞功能的體外研究[D]. 白雪.吉林大學(xué) 2011

碩士論文
[1]巨噬細(xì)胞極化在肝泡型包蟲病中的作用及機(jī)制研究[D]. 王東旭.青海大學(xué) 2018



本文編號：3041195