目的:既往研究發(fā)現(xiàn),趨化因子CCL20在銀屑病、白癜風(fēng)等在內(nèi)的多種自身免疫性皮膚疾病的病理過程中扮演了重要的角色,同時病毒感染也被認為是自身免疫性疾病的重要參與者。皮膚組織是機體抵御外界病原體的第一道屏障,其中角質(zhì)形成細胞被認為在啟動免疫中發(fā)揮了關(guān)鍵的作用。視黃酸誘導(dǎo)基因蛋白I（RIG-I）是固有免疫模式識別受體家族的重要成員,其能夠被病毒復(fù)制的中間產(chǎn)物激活。然而,病毒感染是否會通過RIG-I信號通路影響角質(zhì)形成細胞中CCL20的表達,進而參與自身免疫性皮膚疾病的病理過程仍不清楚。本文使用聚肌胞苷酸（Poly（I:C））來體外模擬病毒感染,探究病毒感染對皮膚角質(zhì)形成細胞CCL20表達的影響,并且通過小干擾RNA沉默關(guān)鍵分子來探究相應(yīng)的分子機制。方法:首先,體外細胞實驗使用Poly（I:C）刺激角質(zhì)形成細胞系HaCaT,通過Western-blot實驗和qRT-PCR實驗探究Poly（I:C）對HaCat中RIG-I表達的影響;接下來,通過實時熒光定量PCR（qRT-PCR）以及酶聯(lián)免疫吸附測定實驗（ELISA）檢測Poly（I:C）對角質(zhì)形成細胞CCL20分泌的影響;線粒體抗病毒信號蛋... 

【文章來源】：現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展. 2020,20(10)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

Poly(I:C）通過RIG-I-MAVS信號通路介導(dǎo)CCL20的表達

NF-κB在MAVS下游發(fā)揮重要作用

Poly(I:C)是病毒復(fù)制中間產(chǎn)物雙鏈RNA(double strand RNA,dsRNA)的類似物。RIG-I作為一種細胞質(zhì)中的模式識別受體[10]，能夠識別病毒復(fù)制中間產(chǎn)物，并且以正反饋的方式使得自身表達升高。所以我們首先使用0.1,0.15,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6μg/m L的Poly(I:C)分別作用于角質(zhì)形成細胞，24小時后通過蛋白免疫印跡實驗檢測RIG-I的表達變化，發(fā)現(xiàn)Poly(I:C)以濃度依賴的方式促進RIG-I的表達，并且在0.6μg/m L時效果最顯著(圖1.A)。接下來，通過qRT-PCR實驗證實在36小時內(nèi)，0.6μg/m L Poly(I:C)能夠顯著的促進RIG-I m RNA水平的升高(圖1.B)。這些數(shù)據(jù)表明，Poly(I:C）能夠促進角質(zhì)形成細胞RIG-I的表達。2.2 Poly(I:C）能夠促進角質(zhì)形成細胞CCL20的表達和分泌


本文編號：3028712